本磁珠基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理,可广泛应用于NGS (Next Generation Sequencing)文库构建中DNA纯化和特定长度DNA片段的分选。BalbNGS DNA Clean Beads适用于不同品牌的DNA、RNA建库试剂盒和文献报道的建库流程,文库的产量、大小分布与AMPure XP Beads高度一致。
  适用范围: 高通量测序文库构建中DNA片段的分选及纯化,PCR反应体系、酶切及连接反应体系中DNA的纯化,游离核酸筛选,核酸提取过程中小片段DNA的去除等。  
产品特点:1.高效:DNA片段纯化得率高;
 2.简便:无需切胶,自由选择所分选DNA片段的长度;
 3.兼容:兼容手工操作或自动化工作站的高通量操作。
  产品组成:| 组分 | 5mL | 60mL | 
| BalbNGS DNA Clean Beads | 5mL | 60mL | 
| 说明书 | 1份 | 
 保存:2~8℃  
质量控制: 试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证文库质量的稳定性和重复性。  
操作流程:A.
DNA纯化操作步骤:1.准备工作:将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30min。配制80%乙醇;
 2.涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀,吸取一定体积(参考表1)磁珠液加入DNA样品中,使用移液器轻轻吸打10次充分混匀;
 3.室温孵育10min,使DNA结合到磁珠上;
 4.将样品短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约5min),小心移除上清;
 5.保持样品始终置于磁力架中,加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30sec后,小心移除上清;
 6.重复步骤5;
 7.保持样品始终置于磁力架中,开盖干燥5min~10min;
 8.将样品从磁力架中取出,加入适量无核酸酶水,使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5min;
 9.在磁力架上静置5min待溶液澄清后,小心吸取上清至一个新的无核酸酶管中。
B.
DNA分选操作步骤:1.准备工作:将磁珠由冰箱中取出,室温平衡约30min。
 配制80%乙醇;
 2.请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀,吸取适量体积磁珠液(参考表2,第一轮分选)加入到纯化后的DNA处理样品中,使用移液器轻轻吸打10次充分混匀;
 3.室温孵育10min,使DNA结合到磁珠上;
 4.将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5min),小心吸取上清至一个新的无核酸酶管中,丢弃磁珠;
 5.加入适量磁珠液(参考表2,第二轮分选),使用移液器吸打10次充分混匀;
 6.室温孵育10min,使DNA结合到磁珠上;
 7.将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5min),小心移除上清;
 8.保持样品始终处于磁力架上,加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 s,小心移除上清;
 9.重复步骤8一次;
 10.保持样品始终处于磁力架上,室温下开盖干燥磁珠约5~10min;
 11.将样品从磁力架上取出,加入适量无核酸酶水,涡旋振荡或使用移液器吹打充分混匀,室温静置2min;
 12.在磁力架上静置5min,待溶液澄清后,小心吸取上清至一个新的无核酸酶管中。
   表1.DNA纯化条件参考| 纯化后DNA片段大小 | 纯化磁珠用量(磁珠体积用量:样品体积) | 
| ≥1Kb | 0.5× | 
| ≥400bp | 1.0× | 
| ≥300bp | 1.2× | 
| ≥200bp | 1.5× | 
| ≥100bp | 2.2~3.0× | 
 表2.DNA片段分选参考条件 | 片段平均长度 | 150~200bp | 200~250bp | 250~300bp | 300~350bp | 350~400bp | 
| 第一轮用量 | 1.0× | 0.9× | 0.8× | 0.7× | 0.7× | 
| 第二轮用量 | 0.3× | 0.2× | 0.2× | 0.2× | 0.1× | 
 | 片段平均长度 | 400~450bp | 450~500bp | 500~550bp | 550~600bp | 600~650bp | 
| 第一轮用量 | 0.6× | 0.6× | 0.55× | 0.5× | 0.45× | 
| 第二轮用量 | 0.15× | 0.1× | 0.1× | 0.15× | 0.15× | 
 举例:“0.7×”代表磁珠与PCR产物的体积比,若PCR产物体积为50μL,则第一轮磁珠用量0.7×50μL=35μL,第二轮磁珠用量为0.2×50μL=10μL,具体PCR产物体积请以使用的建库试剂盒为准。
 注意:由于PCR过程中水分蒸发导致PCR产物体积小于原有体积,请务必用无核酸酶水补齐,否则会导致分选长度和预期不一致。