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百奥莱博
北京
2024-06-20 14:12

北京百奥莱博科技有限公司

VIP会员
王欣
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北京百奥莱博科技有限公司
产品属性
货号JN3240
规格5mL | 60mL
产品说明
本磁珠基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理,可广泛应用于NGS (Next Generation Sequencing)文库构建中DNA纯化和特定长度DNA片段的分选。BalbNGS DNA Clean Beads适用于不同品牌的DNA、RNA建库试剂盒和文献报道的建库流程,文库的产量、大小分布与AMPure XP Beads高度一致。

适用范围:
高通量测序文库构建中DNA片段的分选及纯化,PCR反应体系、酶切及连接反应体系中DNA的纯化,游离核酸筛选,核酸提取过程中小片段DNA的去除等。

产品特点:
1.高效:DNA片段纯化得率高;
2.简便:无需切胶,自由选择所分选DNA片段的长度;
3.兼容:兼容手工操作或自动化工作站的高通量操作。


产品组成:
组分5mL60mL
BalbNGS DNA Clean Beads5mL60mL
说明书1份

保存:2~8℃

质量控制:
试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证文库质量的稳定性和重复性。

操作流程:
A.DNA纯化操作步骤:
1.准备工作:将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30min。配制80%乙醇;
2.涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀,吸取一定体积(参考表1)磁珠液加入DNA样品中,使用移液器轻轻吸打10次充分混匀;
3.室温孵育10min,使DNA结合到磁珠上;
4.将样品短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约5min),小心移除上清;
5.保持样品始终置于磁力架中,加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30sec后,小心移除上清;
6.重复步骤5;
7.保持样品始终置于磁力架中,开盖干燥5min~10min;
8.将样品从磁力架中取出,加入适量无核酸酶水,使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5min;
9.在磁力架上静置5min待溶液澄清后,小心吸取上清至一个新的无核酸酶管中。
B.DNA分选操作步骤:
1.准备工作:将磁珠由冰箱中取出,室温平衡约30min。
配制80%乙醇;
2.请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀,吸取适量体积磁珠液(参考表2,第一轮分选)加入到纯化后的DNA处理样品中,使用移液器轻轻吸打10次充分混匀;
3.室温孵育10min,使DNA结合到磁珠上;
4.将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5min),小心吸取上清至一个新的无核酸酶管中,丢弃磁珠;
5.加入适量磁珠液(参考表2,第二轮分选),使用移液器吸打10次充分混匀;
6.室温孵育10min,使DNA结合到磁珠上;
7.将样品置于磁力架上,待溶液澄清后(约5min),小心移除上清;
8.保持样品始终处于磁力架上,加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 s,小心移除上清;
9.重复步骤8一次;
10.保持样品始终处于磁力架上,室温下开盖干燥磁珠约5~10min;
11.将样品从磁力架上取出,加入适量无核酸酶水,涡旋振荡或使用移液器吹打充分混匀,室温静置2min;
12.在磁力架上静置5min,待溶液澄清后,小心吸取上清至一个新的无核酸酶管中。


表1.DNA纯化条件参考
纯化后DNA片段大小纯化磁珠用量(磁珠体积用量:样品体积)
≥1Kb0.5×
≥400bp1.0×
≥300bp1.2×
≥200bp1.5×
≥100bp2.2~3.0×

表2.DNA片段分选参考条件

片段平均长度150~200bp200~250bp250~300bp300~350bp350~400bp
第一轮用量1.0×0.9×0.8×0.7×0.7×
第二轮用量0.3×0.2×0.2×0.2×0.1×


片段平均长度400~450bp450~500bp500~550bp550~600bp600~650bp
第一轮用量0.6×0.6×0.55×0.5×0.45×
第二轮用量0.15×0.1×0.1×0.15×0.15×

举例:“0.7×”代表磁珠与PCR产物的体积比,若PCR产物体积为50μL,则第一轮磁珠用量0.7×50μL=35μL,第二轮磁珠用量为0.2×50μL=10μL,具体PCR产物体积请以使用的建库试剂盒为准。
注意:由于PCR过程中水分蒸发导致PCR产物体积小于原有体积,请务必用无核酸酶水补齐,否则会导致分选长度和预期不一致。