mRNA合成试剂盒(加帽加尾) 产品官方链接

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2024-06-20 14:12

北京百奥莱博科技有限公司

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王欣
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产品属性
货号MT0125
规格10T | 50T
产品说明
本产品暂时停产,请参考  T7 ARCA mRNA加帽加尾试剂盒(货号:SV1346)

本试剂盒可以快速的体外合成带帽带尾的mRNA。T7 RNA聚合酶通过转录,将抗-反向帽类似物(ARCA)加到mRNA上。经DNase I短暂温育可以去除模板DNA,并在Poly(A)聚合酶的作用下,为加帽的mRNA加Poly(A)尾。利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用,如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义RNA及RNAi实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和RNA疫苗等。

T7 RNA聚合酶识别T7 promoter(TTCTAATACGACTCACTATAGG)以-2位G碱基为起点开始转录,该试剂盒可以从少量样本得到高效转录,单次反应可获得>30μg的mRNA产物,转录长度可达4000nt以上。转录产物80%以上含有7-甲基鸟苷帽结构、Poly(A)尾长度大于80nt。

工作原理:
mRNA合成试剂盒(加帽加尾)原理图

产品组成:
组分10T50T
5×ARCA/NTP mix40μL200μL
5×T7 RNA Pol Buffer40μL200μL
T7 ARCA Enzyme Mix40μL200μL
10×EPAP Reaction Buffer1mL1mL
Poly(A) Polymerase50μL250μL
RNase Free DNase I20μL100μL
RNase Free H2O1mL1mL

保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。

应用实例:
以PCR产物作为模板进行体外转录获得的RNA,应用本试剂盒进行加帽加尾,如图:

泳道1:体外转录获得的RNA,
泳道2:加帽加尾后产物。

使用方法:
1.按以下组分配制转录反应液

成分用量
2×ARCA/NTP Mix4μL
5×T7 RNA Pol Buffer4μL
DNA(RNase-Free)0.1~1μg
T7 ARCA Enzyme Mix4μL
RNase-Free H2Oup to 20μL

2.37℃反应1~2h,转录带帽RNA产量在20~30μg。
3.转录完毕后,向上述反应液中加入2μL RNase-Free DNase I,37℃孵育15min去除DNA模板。
4.进行加尾反应
成分用量
上述转录产物20μL
10×EPAP Reaction Buffer3μL
Poly(A) Polymerase5μL
RNase-Free H2O22μL

放置37℃反应30~60min完成加Poly(A)尾。
5.反应完毕后,可电泳检测或放置-80℃保存。或选用RNA快速纯化试剂盒(货号:MT0126)进行转录RNA的纯化,以去除盐、NTP、蛋白等。