本产品暂时停产,请参考 T7 ARCA mRNA加帽加尾试剂盒(货号:SV1346) 本试剂盒可以快速的体外合成带帽带尾的mRNA。T7 RNA聚合酶通过转录,将抗-反向帽类似物(ARCA)加到mRNA上。经DNase I短暂温育可以去除模板DNA,并在Poly(A)聚合酶的作用下,为加帽的mRNA加Poly(A)尾。利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用,如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义RNA及RNAi实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和RNA疫苗等。
T7 RNA聚合酶识别T7 promoter(TTCTAATACGACTCACTATA
GG)以-2位G碱基为起点开始转录,该试剂盒可以从少量样本得到高效转录,单次反应可获得>30μg的mRNA产物,转录长度可达4000nt以上。转录产物80%以上含有7-甲基鸟苷帽结构、Poly(A)尾长度大于80nt。
工作原理:
产品组成:| 组分 | 10T | 50T |
| 5×ARCA/NTP mix | 40μL | 200μL |
| 5×T7 RNA Pol Buffer | 40μL | 200μL |
| T7 ARCA Enzyme Mix | 40μL | 200μL |
| 10×EPAP Reaction Buffer | 1mL | 1mL |
| Poly(A) Polymerase | 50μL | 250μL |
| RNase Free DNase I | 20μL | 100μL |
| RNase Free H2O | 1mL | 1mL |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。
应用实例: 以PCR产物作为模板进行体外转录获得的RNA,应用本试剂盒进行加帽加尾,如图:

泳道1:体外转录获得的RNA,
泳道2:加帽加尾后产物。
使用方法:1.按以下组分配制转录反应液
| 成分 | 用量 |
| 2×ARCA/NTP Mix | 4μL |
| 5×T7 RNA Pol Buffer | 4μL |
| DNA(RNase-Free) | 0.1~1μg |
| T7 ARCA Enzyme Mix | 4μL |
| RNase-Free H2O | up to 20μL |
2.37℃反应1~2h,转录带帽RNA产量在20~30μg。
3.转录完毕后,向上述反应液中加入2μL RNase-Free DNase I,37℃孵育15min去除DNA模板。
4.进行加尾反应
| 成分 | 用量 |
| 上述转录产物 | 20μL |
| 10×EPAP Reaction Buffer | 3μL |
| Poly(A) Polymerase | 5μL |
| RNase-Free H2O | 22μL |
放置37℃反应30~60min完成加Poly(A)尾。
5.反应完毕后,可电泳检测或放置-80℃保存。或选用RNA快速纯化试剂盒(货号:MT0126)进行转录RNA的纯化,以去除盐、NTP、蛋白等。