本制品是用于Illumina/MGI测序平台的RNA测序文库的cDNA合成试剂盒，包含高效RNA反转录试剂，常规ds-cDNA合成试剂。可衔接Hiper NGS OnePot cDNA&gDNA Library Prep Kit（货号：SY0835）进行后续建库。本试剂盒提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品组成：| 组分 | 8T | 24T | 96T |
| Random Primer | 8μL | 24μL | 96μL |
| 1st Reaction Buffer | 64μL | 192μL | 786μL |
| 1st Strand Enzyme Mix | 16μL | 48μL | 192μL |
| 2nd Reaction Buffer | 56μL | 168μL | 672μL |
| 2nd Strand Enzyme Mix | 24μL | 72μL | 288μL |
保存：-20℃，有效期1年。
自备材料：1．DNA纯化磁珠：Hiper NGS DNA Selection Beads或AMPure XP Beads（A63880）或其他等效产品。
2．文库质检：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/High Sensitivity Chip或其他等效产品；文库定量试剂。
3．其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
注意事项：1．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2．请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。
3．推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。
4．请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用ThermoFisher公司的RNAZap高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
5．PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；配备文库构建专用移液器等设备；定时对各实验区域进行清洁（推荐使用ThermoFisher公司的DNAZap高效核酸去除喷雾），以保证实验环境的洁净度。
6．本制品仅作科研用途！
使用方法：A．
RNA变性1．将Random Primer室温解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。按照下表配置反应液：
表1．RNA预变性反应体系
| 成分 | 用量 |
| Random Primer | 1μL |
| RNA | 14μL |
| 总体积 | 15μL |
2．使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
3．将上述PCR管置于PCR仪中，按照表2所示设置反应程序，进行RNA的预变性。
表2．RNA预变性反应程序
| 温度 | 时间 |
| 热盖75℃ | On |
| 70℃ | 5min |
| 立即置于冰上 | 3min |
B．
第一链cDNA的合成1．将第一链合成试剂从-20℃取出，室温解冻，颠倒混匀后瞬离。按表3所示，配制第一链cDNA合成的反应液。
表3．第一链cDNA合成反应体系
| 成分 | 用量 |
| 变性的RNA | 15μL |
| 1st Reaction Buffer | 8μL |
| 1st Srtand Enzyme Mix | 2μL |
| 总体积 | 25μL |
2．使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
3．将上述PCR管置于PCR仪中，按照表4所示设置反应程序，进行第一链cDNA的合成。反应结束后立即进行第二链cDNA的合成。
表4．第一链cDNA合成反应程序
| 温度 | 时间 |
| 热盖105℃ | On |
| 25℃ | 5min |
| 42℃ | 30min |
| 85℃ | 5min |
| 4℃ | Hold |
C．
第二链cDNA的合成：1．将第二链合成试剂从-20℃取出，解冻后颠倒混匀；按照表5所示，配制第二链cDNA合成反应液。
表5．第二链cDNA合成反应体系
| 成分 | 用量 |
| 1st Strand cDNA | 25μL |
| 2nd Reaction Buffer | 7μL |
| 2nd Strand Enzyme Mix | 3μL |
| 总体积 | 35μL |
2．使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
3．将上述PCR管置于PCR仪中，按照表6所示设置反应程序，进行第二链cDNA的合成。
表6．第二链cDNA合成反应程序
D．第二链cDNA产物可衔接Hiper NGS OnePot cDNA&gDNA Library Prep Kit（货号：
SY0835）进行后续建库。
