本试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强、操作简易。
本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA，如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。
本试剂盒中提供的2×Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性，不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化扩增步骤的操作过程，降低污染机率。
本试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。
产品组成：| 组分 | 50T | 200T | 保存 |
| Lysis Buffer | 10mL | 20mL×2 | 2～8℃ |
| Proteases | 100μL | 400μL | -20℃ |
| 2×Tissue Direct PCR Mix(With Dye) | 500μL | 1mL×2 | -20℃ |
| 5×PCR Enhancer | 200μL | 800μL | -20℃ |
保存事项：1．Lysis Buffer为动物组织裂解缓冲液，建议保存于2～8℃。
2．Proteases为动物组织裂解剂，使用时请勿长久开盖，建议保存于-20℃，避免反复冻融。
3．2×Tissue Direct PCR Mix (With Dye)，建议保存于-20℃，避免反复冻融。
4．5×PCR Enhancer，建议保存于-20℃，避免反复冻融。
组分说明：1．Lysis Buffer和Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解。
2．2×Tissue Direct PCR Mix(With Dye)包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg2+等；已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂，PCR产物可以直接进行电泳。
3．5×PCR Enhancer：高GC含量扩增（如大于65%）时，建议使用5×PCR Enhancer。
注意事项：1．建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
2．为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。
3．本制品仅作科研用途！
操作方法：1．在离心管中加入200μL Lysis Buffer和2μL Proteases，轻轻涡旋混匀。
2．取约10mg（长度2mm左右）动物组织，置于上述离心管中，轻轻涡旋混匀。
3．55℃孵育5～30min，然后95℃处理5min。
4．12000rpm离心2min。
5．将上清转移至新的离心管，-20℃保存或直接用于PCR扩增。
注：
a．Lysis Buffer与Proteases混合后尽快使用，不宜长期保存；大量样本操作时，可以将Lysis Buffer与Proteases按100μL:1μL的比例混匀备用。
b．组织应取少量并尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。各组织推荐使用量：鼠尾：长度2～4mm；鼠趾：1～4个；鼠脏器、脑：直径2～4mm；斑马鱼、线虫、果蝇等昆虫组织：1～4个；细胞数量:105～108个。斑马鱼、线虫、果蝇等较小样本的组织，可适当减少Lysis Buffer至50～100μL。昆虫等外壳坚硬的样本，建议剪碎样本并增加Proteases至4μL。
c．55℃孵育，一般5min即可满足多数PCR需求，如鼠尾、鼠耳等组织；若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至30min或更久；裂解时间可在5～30min之间调整，组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
6．
PCR反应鉴定—PCR反应体系| 成分 | 用量 | 终浓度 |
| 2×Tissue Direct PCR Mix（With Dye） | 10μL | 1× |
| Forward Primer（10μM） | 0.5μL | 0.25μM |
| Reverse Primer（10μM） | 0.5μL | 0.25μM |
| 裂解产物（DNA模板） | 2μL | - |
| 无菌超纯水 | 至20μL | - |
注：各组分使用前应充分混匀。
a．模板使用量：建议总体系的5～20%之间，避免超过总体系的20%。
b．引物终浓度：反应性能较差时，推荐在0.1～0.5μM范围内调整引物浓度。
c．反应体系：推荐使用20μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d．体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
e．对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
7．
PCR反应鉴定-PCR反应条件| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10sec | 35 |
| 退火* | 60℃ | 20sec |
| 延伸 | 72℃ | 20sec |
| 终延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
注
*：退火温度请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值5℃，或通过梯度PCR确定最佳温度。
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2×PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 |
| 阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系，或减少裂解液的用量。 |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液可在4℃保存2～3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系5～20%范围内优化模板加入量。 |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5～10个循环为佳。 |
| 非特异性扩增 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 提高PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 |
| 阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
