本制品是从表达T4 DNA Ligase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本制品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。
A．
粘性末端的连接：1．按以下体系配制反应液：
| 成分 | 用量 | 终浓度 |
| 线性载体DNA | X μL | 20～100ng |
| 插入DNA片段 | Y μL | 插入片段：载体1:1～5:1 |
| 10×Ligation Buffer | 2μL | |
| T4 DNA Ligase(5U/μL) | 0.2μL | 1U |
| ddH2O | 至20μL | |
2．涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：22℃孵育10分钟。
4．瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5．可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
B．
平末端的连接：1．反应体系：
| 成分 | 用量 | 终浓度 |
| 线性载体DNA | X μL | 20～100ng |
| 插入DNA片段 | Y μL | 插入片段：载体1:1～5:1 |
| 10×Ligation Buffer | 2μL | - |
| T4 DNA Ligase(5U/μL) | 1μL | 5U |
| 50% PEG Solution | 2μL | 5% |
| ddH2O | 至20μL | - |
2．涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：22℃孵育1小时。
4．瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5．可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
C．
线性DNA的自身环化：1．反应体系：
| 成分 | 用量 | 终浓度 |
| 线性载体DNA | X μL | 5～50ng |
| 10×Ligation Buffer | 5μL | - |
| T4 DNA Ligase(5U/μL) | 1μL | 5U |
| ddH2O | 至50μL | - |
2．涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4．瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5．可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
