产品简介： 抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬细胞等部位的TRAP和存在于细胞白血病人脾脏TRAP均在细胞滤泡中，并不释放入血液，血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞。因而测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。
在碱性的缓冲液中，细胞内酸酸性磷酸酶催化底物水解，其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联，生成不溶性的偶氮染料沉淀，当底物中存在酒石酸时，该反应只出现在特异性细胞中。
本试剂盒适用于细胞涂片、细胞爬片、血涂片、骨髓涂片、冰冻切片及石蜡切片等的染色。阳性反应为鲜红色或深红色颗粒，定位于胞浆当中。
产品组成：| 组份 | 30T |
| 组分A：固定液A | 40mL |
| 组分B：底物反应液B | 试剂B1 | 干粉1支 |
| 试剂B2 | 500μL |
| 试剂B3 | 干粉1支 |
| 试剂B4 | 500μL |
| 组分C：底物反应液C | 试剂C1 | 干粉1支 |
| 试剂C2 | 500μL |
| 组分D：底物反应液D | 试剂D | 1mL |
| 组分E：底物反应液E | 试剂E1 | 干粉1支 |
| 试剂E2 | 500μL |
| 组分F：苏木素复染液F | 10mL |
| 组分G：甲基绿复染液G | 10mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：2～8℃避光保存；三个月。
自备仪器及试剂：
● 光学显微镜● 染缸● 移液器● 秒表● 纯水● 载玻片
注意事项： ● TRAP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色；
● 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
● 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
● 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
● 一般不建议用石蜡切片。如果需要用石蜡切片，组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
● 石蜡切片不需要固定。
● 水洗后不要太干即放入孵育液中孵育，太干后染色效果会变差。
● 用底物孵育液孵育时要注意避光。
● 如果样本为骨片的石蜡切片，不可用酸脱钙法脱钙，酸脱钙对蛋白质的影响较大，使细胞中的特异性酶失活，从而影响特异性的酶染色，导致酶不能跟底物结合，会使染色失败。请使用其他对蛋白质的影响小的脱钙方法。
使用方法： 工作液的配制：1．底物反应液B配制：使用前用移液器将试剂B2吸入试剂B1中，溶解混匀，配成甲液；将试剂B4吸入试剂B3中，溶解混匀，配成乙液。将甲液和乙液混匀即成底物反应液B。
2．底物反应液C配制：使用前用移液器将试剂C2吸入试剂C1中，溶解混匀，即成底物反应液C。
3．底物反应液E配制：使用前用移液器将试剂E2吸入试剂E1中，溶解混匀，即成底物反应液E。
4．底物孵育液的配制：在染色缸中加入30mL蒸馏水，37℃水浴10分钟。将底物反应液B、C、D、E依次加入已预温的蒸馏水中混合并充分混匀。
注：
● 所有的工作液请使用前新鲜配制，配制后立即使用，一次使用完，不可放置。
样本的染色处理： 一、血涂片及骨髓涂片1．推片：
取全血或骨髓3μL左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30°角，置于血滴正前方，稍微往后移与血滴接触，血滴沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动，至血滴铺完血膜为止。不要太薄，以免细胞太少，也不要太厚，以免太重叠。
2．固定：
让涂片在空气中自然晾干，再放入本试剂盒中的固定液A中固定2～3分钟，水洗30～60秒。
3．孵育：
水洗后还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
4．复染：
孵育完后，取出水洗1分钟，在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1～2分钟，或者用甲基绿复染2～3分钟，两者任选其一即可。
二、细胞涂片及细胞爬片1．固定：
将细胞涂片或细胞爬片放入本试剂盒中的固定液A中固定2～3分钟，水洗30～60秒。
2．孵育：
水洗后还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
3．复染：
孵育完后，取出水洗1分钟，在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1～2分钟，或者用甲基绿复染2～3分钟，两者任选其一即可。
三、冰冻切片1．回温：
将保存在-20℃的冰冻切片放置到切片架上回温5～10分钟。可以放在37℃孵箱中进行回温，或者将切片架放置在一个小盒子中，将盒子置于37℃水浴锅中进行回温。
2．水合：
将回温好的切片，水中浸泡1～2分钟。
3．固定：
让切片在空气中自然晾干，再放入本盒中的固定液中固定2～3分钟，水洗30～60秒。
4．孵育：
水洗后还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
5．复染：
孵育完后，取出水洗1分钟，在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1～2分钟，或者用甲基绿复染2～3分钟，两者任选其一即可。
四、石蜡切片1．脱蜡：
二甲苯中脱蜡5～10分钟。再换用新鲜的二甲苯脱蜡5～10分钟。
2．浸泡：
无水乙醇浸泡5分钟。再分别用90%、70%乙醇各2分钟。
3．水合：
蒸馏水中浸泡2分钟。
4．孵育：
还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
5．复染：
孵育完后，取出水洗1分钟，在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1～2分钟，或者用甲基绿复染2～3分钟，两者任选其一即可。
结果分析： 阳性反应为鲜红色或深红色颗粒，定位于胞浆中。
常见问题： ● 细胞诱导不成功？
细胞系或原代BMM细胞诱导破骨细胞时，细胞因子的质量很重要。诱导效果不好时可以考虑调整诱导条件，提高RANKL浓度或者尝试是否添加M-CSF。
● 如何判断阳性细胞？
一般不通过形态变化说明，RAW细胞非常形态非常多样，形态变化并不能说明问题。一般认为多核加上TRAP阳性才能说是多核破骨细胞。
