天然腔肠素是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,也是水母发光蛋白的辅助因子,应用非常广泛,可用于检测活细胞中钙离子浓度,基因报告分析,BRET(生物发光共振能量转移)研究,ELISA,HTS,以及组织或细胞中ROS水平的化学发光检测。
基本信息:| 中文别名 | 天然腔肠素;腔肠素游离酸 |
| 英文别名 | Renilla luciferin;Coelenterazine free base |
| CAS号 | 55779-48-1 |
| 分子式 | C26H21N3O3 |
| 分子量 | 423.46 |
| 外观 | 黄色固体 |
| 溶解性 | 溶于甲醇或者乙醇,不可溶于DMSO |
| 纯度 | >97%(TLC) |
| 结构 |  |
产品组成:| 组分 | 500μg | 2×500μg | 5mg |
| 天然腔肠素 | 500μg | 2×500μg | 5mg |
| 说明书 | 1份 |
保存:-20℃,避光,最好保存在惰性气体环境下,避免接触空气。长期保存请置于-70℃可保存2年。
溶液配制: 对于所有进行荧光信号检测的试验建议溶液现用现配。建议可用乙醇或丙二醇配制成储存液(配制浓度可参考文献推荐)。在使用时需将储存液用合适的缓冲液稀释成工作液。
注意:
1.在用蒸馏水或者PBS及其他的溶液进行腔肠素储存液的稀释时需排除稀释液中的气泡。同时工作液最好呈弱酸性,既可以减缓腔肠素的氧化,同时也可防止沉淀的析出。但是弱酸也有可能对后续荧光强度RLU的检测造成误差。
2.腔肠素的工作液不稳定,避免过夜保存。
注意事项:1.保存时若接触空气,时间过久会使得腔肠素氧化,造成实验结果的不准确性。
2.对于储存液的制备,较稳定的是保存于丙二醇中,同时可加入还原剂如L-抗坏血栓,β-巯基乙醇,DTT,DTE(二硫赤糖醇),或少量的盐酸。还原剂的存在可能会破坏荧光素酶的结构,也会影响腔肠素的氧化速率。
3.腔肠素在醇类物质中的冰冻保存可能会导致沉淀的析出(和浓度有关),可通过将溶液加热至50~60℃至其溶解。在使用前请确保眼观无沉淀。
4.最适溶剂的选择取决于多种因素,如还原剂。对于水母发光蛋白的检测,可选用β-巯基乙醇,因为此还原剂能够使水母发光蛋白更好地与腔肠素作用。但对于Gluc蛋白的检测,由于蛋白中含有5对二硫键,在还原剂的存在状态下不能够检测到荧光信号。
5.腔肠素在不同溶剂中的溶解特性:(单位:mg/mL)
| 溶剂 | 室温 | 60℃(Vortex) |
| Methanol 100% | 46 | 70 |
| Ethanol 100% | 64 | 196 |
| Propanol 100% | 82 | 204 |
| Butanol 100% | 86 | 180 |
| Propylene Glycol | 24 | 240 |
| b-Mercaptoethanol | 160 | 268 |
注:
a.腔肠素的丙二醇溶液在室温下的溶解度较低,但是在-70℃的状态下没有沉淀析出。
b.腔肠素在β-巯基乙醇中的溶解度在室温和60℃时都是最高的,但能够稳定存在的时间还有待进一步测试。
6.当使用多孔板进行荧光值的检测时,建议通过设置对照孔来消除由于腔肠素在工作液中不断被氧化所带来的误差。
附录参考: 附录1.腔肠素及其衍生物的特性| 货号 | 产品名称 | 基本描述 | Em (nm) | RLC* | Relative Intensity | Half-rise time (ms)** |
| SY0234 | 天然腔肠素 | 水母发光蛋白的辅助因子,高灵敏度化学发光法检测Ca2+浓度(0.1~100μM)。常用作Rluc和Gluc等荧光素酶的报告基因检测底物。BRET分析,以及细胞/组织样本中的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子的化学发光检测。快速再生能力比较重要的实验推荐使用本底物。 | 466 | 1.00 | 1 | 6-30 |
| SY0235 | 腔肠素h | 一种水母发光蛋白复合物,其发光强度比天然腔肠素高10倍以上。适用于报告基因分析。 | 466 | 0.75 | 16 | 6-30 |
| SY0239 | 腔肠素hcp | 腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍,且量子产量高和Ca2+反应速度快。 | 445 | 0.65 | 500 | 2-5 |
| SY0238 | 腔肠素cp | Coelenterazine cp光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的15倍,且具有更快的Ca2+反应性。 | 442 | 0.63 | 28 | 2-5 |
| SY0237 | 腔肠素f | 腔肠素f-光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的20倍。其具有最好的细胞渗透性。当需要极高的检测Ca2+灵敏度研究水母蛋白再生实验研究中,推荐使用本底物。 | 472 | 0.80 | 20 | 6-30 |
| SY0240 | 腔肠素n | 所有的腔肠素衍生物中荧光强度是最弱的,且对Ca2+反应速率也明显低于天然腔肠素。非常有用的Ca2+低灵敏检测底物。 | 468 | 0.25 | 0.15 | 6-30 |
| SY0241 | 腔肠素e | 具有最高的体外水母发光蛋白反应性,且具有双发射峰,可在pCa5~7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度,从而提高检测精确性。腔肠素e的荧光强度是天然腔肠素的137%。 | 405 &465 | 0.5 | 4 | 0.15-0.3 |
| SY0242 | 二甲基腔肠素 | 可高效作用于ROS(如单态氧、超氧阴离子),是一种已报道的强抗氧化剂。 | / | / | / | / |
| SY0825 | 腔肠素400a | BRET研究中Rluc的底物。在390nm和400nm之间发蓝色光,对GFP受体蛋白的光发射干扰最小。不可作为Gluc底物。 | 400 | / | / | / |