生物素-HPDP是与巯基(-SH)基团反应的膜可渗透的生物素标记试剂。巯基和生物素基团之间的二硫键可以被还原剂切割，释放出生物素基团，并以蛋白质(或肽)原始的形式再生(图1)。在用固定的抗生物素蛋白或链霉亲和素纯化目标分子，用于还原SDS-PAGE或质量分析时，使用生物素HPDP标记是非常方便的。标记的生物素化分子可以通过二硫苏糖醇(DTT)或其它还原剂裂解二硫键，从载体上有效地洗脱，并不是用强酸或变性剂来解离抗生物素蛋白和生物素之间的高亲和力结合作用。

生物素-HPDP的2-吡啶基二硫基基团在pH7～8与游离(还原)的巯基的反应效果最好。反应缓冲液必须不含硫醇和二硫化物还原剂，猝灭或还原时才需要2-吡啶基二硫醇。

生物素-HPDP与巯基的反应置换了吡啶-2-硫酮基团，其浓度可以通过测量343nm处的吸光度来确定(参见附加信息部分)。对于足够浓度的反应，该测量能够监测反应进程。

为了制备可用于标记的巯基(-SH)，用固定的TCEP二硫化物还原凝胶来还原肽二硫键。使用5～10mMDTT或TCEP溶液还原蛋白质二硫键，然后脱盐。请注意蛋白质(例如抗体)在完全还原其二硫键后可能会失活。可以使用SATA或2-亚氨基硫烷·HCl将巯基引入伯胺位置。

当生物素化蛋白质在溶液中时，过量的未反应的生物素通过使用脱盐柱或透析的尺寸排除容易地去除。根据下游应用，可以使用C18树脂从过量的非反应生物素试剂中纯化生物素化的肽。

中文名称	N-(6-[生物素胺]己基)- 3-(2-吡啶二硫)丙酰胺
分子量	539.78
间隔臂长度	29.2 Å
结构式