中国科学院广州化学研究所分析测试中心
林工----18520455512/13538966285

特性粘数及分子量的测定方法 

A1 仪器
A1.1 乌氏粘度计：Fisher13—614型。 A1.2 恒温水浴：控温精度±0.1℃。 A1.3 秒表：分度值0.01s。 
A1.4 电子天平：感量0.0001g。 A1.5 立式搅拌器。 
A1.6 容量瓶：100mL。 A1.7 移液管：50mL。 
A1.8 烧杯：250 mL，500mL。 A1.9 玻璃砂芯漏斗：G0型。
A2 试剂和溶剂
本分析方法所用试剂和水，均为分析试剂及去离子水。缓冲溶液含量如下： a) 柠檬酸（含一个结晶水）：1.335g； b) 磷酸氢二钠：26.6g; c) 氯化钠：116.9g; d) 去离子水加至1L.
A3 试样溶液的配置
A3.1 根据附录B测出试样的固含量S。 
A3.2 称取（200-1/S）g的去离子水（准确至0.01g）于500 mL 烧杯中。 A3.3 调整搅拌器的速度至（400±20）r/min,使去离子水形成漩涡。 
A3.4 称取（1/S）g试样（准确至0.0001g）,在1min内缓慢而均匀地将试样撒入漩涡壁中，搅拌2h至试样完全溶解。
A4 试验样品溶液的稀释
A4.1 准备五个100mL容量瓶。称取四份不同重量（4、6、8、10克）的母液分别装入四个容量瓶中。 
A4.2 用移液管在五个容量瓶中分别加50 mL缓冲溶液并摇匀。 A4.3 用去离子水分别加至100 mL刻度并摇匀。
A5 测定步骤


A5.1 在干燥的乌氏粘度计中装入经玻璃砂芯漏斗过滤后的待侧溶液。 A5.2 将乌氏粘度计垂直置于30℃恒温水浴中，最少恒温10min。 A5.3 测量待侧溶液在粘度计两刻度之间的流动时间，精确至0.01s。 A5.4 重复测定三次，测定结果相差不超过1s，取其平均值。 A5.5 缓冲溶液的流出时间按5.1-5.3的规定重复测定三次，测定结果相差不超过0.5s。 
A6 特性粘数的结果表示
特性粘数用图解技术来确定 
A6.1 用下式计算4种溶液的粘度比。
t - t0 ηsp= 
t0 式中：ηsp----增比粘度，无量纲； t-----试样溶液的流经时间，s
t0---- 缓冲溶液的流经时间，s 。
A6.2 计算各溶液的ηsp/C值，C为试样溶液的浓度，即100g试样溶液中聚丙烯酰胺的克数。 
A6.3 在坐标纸上以ηsp/C为纵坐标，C为横坐标作图。 
A6.4 用外推法求曲线上直线部分在坐标上的截距，读出特性粘数（IV）。
A7 分子量的计算
分子量按下式计算：
Mη=(IV/0.000373)1.515 
式中：Mη---- 粘均分子量； 
IV-----特性粘数； 
0.000373----- 为经验常数； 1.515------为经验常数
主要应用:
1、生物大分子的分子量检测
2、蛋白质、多肽的纯度鉴定
3、蛋白质的肽指纹图谱检测
4、混合组分的分子量分布检测
5、合成物质的分子量检测与纯度评价
6、重组蛋白的分子量检测与纯度评价
7、蛋白质的多肽谱检测
8、血清多肽谱的检测
9、PEG修饰的蛋白药物的研究

样品要求:
1、样品含量: 50-100Fmol (液体约5ul)
2、样品形式: 液体；干粉；胶粒/条带
3、非胶样品: 挥发性盐<20mM，无PBS、SDS和尿素等物质
4、胶类样品: 银染过程中未使用戊二醛作为固定剂
5、保存方式: 液体建议低温，胶类用去离子水防干

客户提供信息:
1、样品来源: 1D/2D/LC/合成等
2、样品含量: 浓度，定量方法
3、样品状态: 稳定性，溶剂系统，可能杂质
4、样品信息: 物种，毒性，活性及检测方法，预测结构，目标物预测分子量等

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