HB170619
产品信息| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit | 12603ES24 | 24 T | 2-8℃保存 | 616.00 |
| Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit | 12603ES96 | 96 T | 2-8℃保存 | 2266.00 |
产品描述Hieff NGS
TM mRNA Isolation Master Kit是翊圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo（dT）的微米级顺磁性微球，通过与带有poly（A）尾巴的mRNA相结合，将mRNA从0.1-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。
产品组分
运输与保存方法冰袋运输。2-8℃保存，效期一年。
避免冷冻！使用方法一、自备材料磁力架，Nuclease-free离心管。
二、操作流程
图1 mRNA纯化试剂盒操作流程
将mRNA Capture Beads从4℃取出，静置使其温度平衡至室温（约30 min）。
3.2 样本准备在一个Nuclease-free PCR管中，用Nuclease-free water将0.1-4 μg总RNA稀释至50 μL，冰上放置备用。
3.3 mRNA与磁珠的结合① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠，吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 的RNA样品中，用移液器反复吹打6次，
使其充分混匀。
② 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中，65℃，5 min；4℃，hold，使得RNA变性。
③ 室温孵育5 min，使mRNA与磁珠完全结合。
④ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，使mRNA与总RNA分离，小心移除上清。
3.4 样本的洗涤① 将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。
③ 重复上一步骤，共洗涤两次。
3.5 mRNA样本第一轮洗脱① 将样品从磁力架上取出，加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品放置于PCR仪中，80℃，2 min；25℃，hold，将mRNA洗脱下来。
3.6 mRNA与磁珠的再次结合① 加入50 μL Beads Binding Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 室温孵育5 min，使mRNA结合到磁珠上。
③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。
3.7 样本的洗涤将样品从磁力架上取出，加入Beads Wash Buffer，用移液器反复吹打6次彻底混匀，将样品重新放回至磁力架中，室温静置5 min，然后吸除全部上清。
【注】：最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。
3.8 mRNA样本终洗脱方案一：用于逆转录反应。
将样品从磁力架上取出，加入12 μLNuclease-free water重悬磁珠，用移液器吹打6次以彻底混匀。将样品置于PCR仪中80℃，2 min后，立即置于磁力架上，室温静置5 min。待溶液澄清后，小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。
方案二：用于RNA文库的构建。
可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer，进行文库构建。
【注】：样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用（建议立即进行后续反应），也可以置于-80℃保存。
注意事项1）磁珠使用前务必要回温至室温，并充分混匀，否则可能影响样品的回收效率。
2）操作过程要严格保证无RNase酶和核酸污染。
3）本产品和其他试剂配套使用时，请按照具体实验说明来进行操作。
4）想要获得好的纯化效果，需要有完整度良好的总RNA，确保RIN值在7.0及以上。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
