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硫氧还蛋白还原酶（TrxR）检测试剂盒 可见分光光度法

¥240
Solarbio
北京
2021-06-11 08:46
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北京索莱宝科技有限公司

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北京索莱宝科技有限公司
马金成
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产品属性
保存条件4℃保存
英文名Oxidized Thioredoxin Reductase (TrxR) Assay Kit
数量99
供应商北京索莱宝科技有限公司
规格50管/48样
产品说明

产品名称:：硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测试剂盒

产品英文名：Oxidized Thioredoxin Reductase (TrxR) Assay Kit

产品货号：BC1150产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格：50管/48样产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存； 参考价格：450
库存状态：现货
关键字：硫氧还蛋白氧化还原酶试剂盒|活性检测试剂盒|TrxR活性检测|试剂盒|

简要介绍：
TrxR 是一种NADPH 依赖的包含FAD 结构域的二聚体硒酶，属于吡dian核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与GR 活性类似，催化GSSG 还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR 催化NADPH 还原DTNB 生成TNB 和NADP+，TNB 在412 nm 有特征吸收峰，通过测定412nm 波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR 活性。

产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入5 mL蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5 mL蒸馏水溶解。
试剂四：液体×1支，-20℃避光保存。
产品说明：
TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡dian核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412 nm有特征吸收峰，但还原型谷胱甘肽与DTNB同样能反应生成TNB，因此本试剂盒利用2-乙烯吡dian抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
  1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待检测。
  2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 s，间隔7s，总时间3min），然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定前将上清液与试剂四以50：1的体积比混匀（即取100μL上清液加入2μL试剂四混合）37℃水浴30min后至冰上。
二、TrxR测定操作：
1. 分光光度计预热30 min后，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入100μL试剂二，100μL试剂三，800μL试剂一，迅速混匀后于412 nm测定10 s时吸光度，然后将比色皿放入37℃水浴5min后混匀立即测定310 s吸光度，记为A1和A2。△A空白管=A2-A1。
4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入100μL试剂二，100μL试剂三，700μL试剂一，100μL上清液，迅速混匀后于412 nm测定10 s时吸光度，然后将比色皿放入37℃水浴5min后混匀立即测定310 s吸光度，记为A3和A4。△A测定管=A4-A3。
三、TrxR活性计算：
（1）按蛋白浓度计算
活性单位（U）定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol DTNB还原为一个酶活力单位。
TrxR（U/mg prot）=（△A测定管-△A空白管）÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T
=0.147×（△A测定管-△A空白管）÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
活性单位（U）定义：在25℃或者37℃中，每克样品每分钟催化1μmol DTNB还原为一个酶活力单位。
TrxR（U/g 鲜重）=（△A测定管-△A空白管）÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T
=0.147×（△A测定管-△A空白管）÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位（U）定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1μmol DTNB 还原为一个酶活力单位。
TrxR（U/104 cell）=（△A 测定管-△A 空白管）÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V样总)÷T
= 0.147×（△A 测定管-△A 空白管）÷细胞数量
ε：TNB在412nm处的微摩尔消光系数，0.0136 L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积（L），1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；T：反应时间（min），5 min；W：样品鲜重，g；V样总：提取液体积，1mL。
注意事项:测定前须先取1～2个样做预实验，使得吸光值在5min内程线性变化。哺乳动物组织及血液制品TrxR活力测定时，一般须用蒸馏水稀释5倍左右；测定过程操作须迅速。

相关文献：
《Regulation of ROS-NF-κB axis by tuna backbone derived peptide ameliorates inflammation in necrotizing enterocolitis.》 作者:Le Zhang , Jianfeng Fan , Jingya He , Wenjuan Chen, Weilai Jin ,Yuting Zhu, Haibing Sun, Yawen Li ,Yingzuo Shi , Yulei Jing ,Xiaolei Wang , Shuping Han ,Zhengying Li 期刊:J. Cell. Physiol. 影响因子:4.522 PMID:30656693
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