报告基因检测
Firefly & Renilla Dual Luciferase Assay Kit（双荧光素酶
报告基因检测试剂盒）为双报告基因检测提供有效的手段。
在 DLR 检测中，萤火虫（Firefly）荧光素酶和海肾（Renilla）
荧光素酶的活性可在单个样品中依次检测。首先是先以荧光
素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)，
后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾荧光素酶
(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾荧光素酶底物时，
同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化 luciferin 发光的物质，使
后续检测仅仅检测到海肾荧光素酶的活性，实现双荧光素酶
报告基因检测。通过荧光素酶和其底物这一生物发光体系，
可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因
的转录调控元件或 5' 启动子区克隆在 luciferase 的上游，或
把 3'-UTR 区克隆在 luciferase 的下游等，构建成报告基因
(reporter gene)质粒，然后转染细胞，用适当药物等处理细胞
后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低
来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。 Renilla
luciferase 相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞
数量和转染效率的差异。
萤火虫荧光素酶是一种分子量约为 61 kD 的蛋白，在
ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化 luciferin 氧化
成 oxyluciferin，在 luciferin 氧化的过程中，会发出生物荧
光(bioluminescence)。海肾荧光素酶是一种分子量约为 36 kD
的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化 coelenterazine 氧
化成 coelenteramide，在 coelenterazine 氧化的过程中也会发
出生物荧光。生物荧光可以通过化学发光仪(luminometer)
或液闪测定仪进行测定。该试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、
检测范围广，无细胞内源活性干扰等特点。
