人成纤维细胞无血清培养基

价格：¥2248

品牌：APPLIED CELL

产地：上海

最新更新日期：2021-06-11 17:31

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产品属性

供应商	上海埃泽思生物科技有限公司

规格

500ml

产品说明

人成纤维细胞无血清培养基
产品基本信息

产品名称	Applied Cell^®人成纤维细胞无血清培养基
货号	AC-1001015
规格	500mL
运输保存条件	基础培养基2-8℃，添加剂-20--80℃
使用范围	人真皮/肺/心脏等多种组织器官来源成纤维细胞培养
保质期	12个月

产品简介

人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^®）自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维细胞原代分离、扩增与传代培养，且不含动物血清，内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。

产品特性

无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
全程无血清生产，极大降低批次间差异。
可用于原代分离。
内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平。

产品组成

组分	规格	数量	运输
人成纤维细胞基础培养基	450mL	1瓶	冰袋
人成纤维细胞添加剂	50mL	1瓶	干冰

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操作方法
人成纤维细胞培养基配制

1.137℃快速解冻人成纤维细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融。

1.2将添加剂以10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中，混匀，即为人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。混合后培养基可在2-8℃稳定储存2-3周，不建议使用已配制超过3周的培养基。
1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。
操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)
人成纤维细胞复苏(10cm dish)
2.1 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞，迅速放入37℃水浴快速融解。
2.2在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。
2.31200rpm离心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纤维细胞培养基重悬细胞。
2.4将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO₂的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。
2.524h后更换新鲜人成纤维细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。
人成纤维细胞传代培养
1.在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。
2.在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。
3.室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4.加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
5.将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1200 rpm离心3 min。
6.弃上清，加入人成纤维细胞培养基，重悬细胞，计数。1：2-1：4比例传代，或按2-5x10⁴cells/cm²传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂培养箱中培养。
注意：人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关，所以传代时细胞密度不宜过稀。
人成纤维细胞冻存
1. 细胞达到90%汇合度，吸掉原有培养基，PBS清洗一次。
2.加入细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3.加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
4. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。
5.加入适量无血清细胞冻存液（治疗级）（AC-1001006），调整细胞冻存密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。
6.直接放入-80℃，24h后转入液氮中长期保存。
质量控制

检验项目 Test Catagories	参考数据 Reference Data	结果 The results
外观 Physical APPearance	橙红色液体 Orange-red liquid	符合规定 Conform to the provisions
澄清度 Clarity	澄清 Clear	符合规定 Conform to the provisions
pH值 Ph value	6.9-7.3	符合规定 Conform to the provisions
渗透压 Osmolality	270-340 （mosm/KgH2O）	符合规定 Conform to the provisions
细菌内毒素 Endotoxin	小于0.06 EU/ml	符合规定 Conform to the provisions
无菌 Sterility	无菌 Sterility	符合规定 Conform to the provisions
支原体 Mycoplasma	0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration	符合规定 Conform to the provisions

人成纤维细胞无血清培养基

上海埃泽思生物科技有限公司

产品简介

产品特性

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