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DNA样品污染去除

价格：￥1

品牌：xuanya

产地：中国/美国

最新更新日期：2021-06-11 18:17

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上海烜雅生物科技有限公司

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产品属性

保存条件

常温运输和保存

保质期

两年

英文名	Solution Endotoxin Erasol

数量

860

供应商	上海烜雅生物科技有限公司

规格

100 次

产品说明

DNA样品污染去除产品及特点：
去除液体生物样品（包括质粒DNA样品）中污染的内毒素(endotoxin)具有重要的临床意义，因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖，即lipopolysaccharides)是包括E.coli在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分，并且带电性跟DNA类似，所以从E.coli细胞中提取的质粒DNA和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污染，并且很难用用常规方法（包括硅胶膜吸附，离子交换吸附、凝胶排阻过滤、氯化铯超速离心）去除。本产品就是专门用于高效去除生物样品中的内毒素污染。
1.简单快速，一次处理只需要20分钟左右，不需要复杂仪器设备。
2.高效，一次处理可以去除90%以上的内毒素，经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到0.2EU(endotoxinunit，约0.1ngLPS)/mL以下。
3.适用范围广，可用于DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。
4.不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA可用于转染实验。
5.既可小规模使用(在1.5mL离心管内)，也可放量使用。

DNA样品污染去除运输及保存：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：无内毒素的水或TE缓冲、3M醋酸钠、乙醇

DNA样品污染去除使用方法
如果使用前本产品有分层，冰浴后振荡混匀。
一：用于体积小于500uL的DNA/RNA样品
1.在一干净的离心管中加入500uL的样品。如果不足500uL,可以用水或TE补足。
2.加入50uL的3M醋酸钠（pH5.2），混匀后冰浴5分钟。
3.加入50uL预冷的本产品，充分混匀后冰浴10分钟。
4.65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止（一般需要1-5分钟）。5.室温12000-15000×g离心2分钟(不能低温离心)，离心后上层为无色透明，下层为淡蓝色。
6.将上清转移到新的离心管中。
7.如果需要，可以重复步骤3～6。
8.加1倍体积的或两倍体积的乙醇，混匀,12000-15000×g离心30分钟。
9.弃上清后用70%酒精洗2次。
10.空气干燥沉淀后加入100uL无内毒素的水或TE缓冲液溶解沉淀。
11.测定DNA和内毒素的含量，与未纯化的样品比较。

DNA样品污染去除二：用于体积大于500uL的DNA/RNA样品整个操作同上，只是在15或50mL塑料离心管中进行，离心速度不能超过离
心管的承受力。

DNA样品污染去除三：整合到碱变性法质粒DNA制备过程中整个操作同上，只是：
1.样品必须是加溶液III离心后得到的上清液或最后得到的质粒溶液。
2.如果处理的是加溶液III离心后得到的上清液，可以略去第2步操作。
3.处理后的溶液需要用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度，然后上柱，以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。
4.洗脱DNA所用水或溶液必须无内毒素污染。

DNA样品污染去除四：对蛋白质和其它生物样品整个操作同上，只是：
1．略去第2步操作，加3M醋酸钠（pH5.2）只为沉淀核酸。
2．第4步改为37℃保温以免蛋白质变性，溶液呈混浊状或分相一般需要20-30分钟。
3．略去第8步和以后操作。

DNA样品污染去除常见问题
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子（类似于细胞膜的磷脂分子），能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。

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