Cre 重组酶产品及特点：

Cre 重组酶是细菌噬菌体 P1 的 I 型拓扑异构酶，催化 loxP 位点间的 DNA 进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre 介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP 识别元件是一个 34bp 序列，其两端是两个 13bp 的反向重复序列，中间是起定向作用的 8 bp 间隔区。重组产物根据 loxP 位点的位置和相对方向而不同，两个含单 loxP 位点的 DNA 将被融合。两个正向重复 loxP 位点间的DNA 将以环状形式切割，而两个反向 loxP 位点间的 DNA 序列将被翻转。本产品作用原理图如下：

本产品具有下列特点：

1. 两个 loxP 位点之间 DNA 的切割

2. 含 loxP 位点 DNA 分子的融合

3. loxP 位点之间 DNA 序列的翻转

Cre 重组酶反应条件

1X Cre 重组酶反应缓冲液 [33 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @25℃)，10 mM MgCl2]，37℃ 温育。Buffer 成分

15 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，0.3 mg/ml BSA，50% Glycerol，pH8.0 @ 25℃

热失活

70℃ 10 分钟。

Cre 重组酶备注

建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将 Cre 重组酶反应混合物于 70℃ 温育 10 分钟。由于 Cre 重组酶反应是一个动态平衡过程，用 loxP 2+ 对照底物仅有 20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故溴化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。延长温育时间不会提高重组效率，相反，还可能导致大分子量重组产物的生成。反应中增加 Cre 重组酶量将形成loxP依赖性 Cre - DNA 复合物，从而抑制重组反应。