| 规格 | 60次 |
| 数量 | 100 |
| 保存条件 | 4℃ |
| 货期 | 现货 |
TBE-尿素-PAGE电泳可以选择RTM501 单链DNA Marker（25-75 nt）作为分子量标准。
DNA尿素PAGE电泳试剂盒
DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit
货号 | 名称 | 规格 |
RTE4102 | DNA尿素PAGE电泳试剂盒 | 60次 （1mm厚12%胶） |
● 产品组成：
货号 | 名称 | 规格 | 保存条件 |
AC2914-01 | 40%PAA(29:1) | 100 ml | 4℃ |
TB002 | 10×TBE | 500 ml | RT |
RU5080 | 尿素（电泳级） | 220 g | RT |
AP020P | APS（干粉） | 5 ml | RT (配制后-20℃贮存) |
TA0761-01 | TEMED | 0.5 ml | 4℃，避光 |
DL080-01 | 2×TBE尿素上样缓冲液 (尿素变性胶) | 1 ml | 4℃ |
● 产品简介：
DNA尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。
本公司提供的DNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制各种浓度的PAGE胶，使用方便。
按照每次制备7 ml 10%凝胶（大小10×8cm，1mm厚度）计算，试剂盒可使用至少60次。
● 贮存和运输：
试剂盒按照标签温度贮存，有效期一年。试剂盒常温运输。
● 使用说明：
一、制备凝胶：
10% APS配制-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期12个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
1.1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
1.2．分离胶配制：根据表格一，将不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解。
表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)
单链DNA长度 | 最佳凝胶浓度 | 尿素（克） | 40%PAA （29:1） | 10×TBE | 补水到总体积 | 10%APS | TEMED |
200-1000 nt | 5% | 2.1克 | 0.625 ml | 0.5 ml | 5 ml | 50 μl | 5 μl |
50-400 nt | 8% | 2.1克 | 1 ml | 0.5 ml | 5 ml | 50 μl | 5 μl |
40-350 nt | 10% | 2.1克 | 1.25 ml | 0.5 ml | 5 ml | 50 μl | 5 μl |
30-300 nt | 12% | 2.1克 | 1.5 ml | 0.5 ml | 5 ml | 50 μl | 5 μl |
10-150 nt | 15% | 2.1克 | 1.875 ml | 0.5 ml | 5 ml | 50 μl | 5 μl |
8-120 nt | 20% | 2.1克 | 2.5 ml | 0.5 ml | 5 ml | 50 μl | 5 μl |
1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.4静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
1.5去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)
各组份体积（ml） | ||||||
凝胶浓度 | 尿素 | 40%PAA（29:1） | 10×TBE | 灭菌水 | 10%APS | TEMED |
4% | 0.84克 | 0.2 ml | 0.2 ml | 补水2 ml | 20 μl | 2 μl |
1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二、电泳：
2.1. 预电泳：拔出梳子，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。
注：试剂盒配套的10×TBE缓冲液仅够配制凝胶用，1×TBE电泳缓冲液请自己制备，配方如下：
终浓度 | 顺序 | 原料 | 1升 | 5 升 |
89 mM | 1 | Tris碱 [MW121.14] | 10.8 克 | 54克 |
2 mM | 2 | EDTA 2Na·2H2O [MW372.24] | 0.744 克 | 3.72克 |
89 MM | 3 | 硼酸 [MW61.83] | 5.5 克 | 27.5克 |
| 4 | 超纯水最后定容至 | 1 升 | 5 升 |
|
| 最后pH在8.2-8.3之间，可以不用调节pH，记录每批pH | ||
2.2. 取 3-5 μl样品,加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液，70℃处理5 分钟后立即冰浴，上样。
2.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
| 恒电压 | 起始电流 | 结束电流 | 电泳时间 | 适用条件 |
推荐电压 | 200V | 15-20 mA/板胶 | 10-15 mA/板胶 | 60+ min | 最佳电压，最优的分辨率 |
2.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
变性胶浓度 | 溴酚蓝 | 二甲苯菁 |
5% | 35 nt | 130 nt |
8% | 19 nt | 75 nt |
10% | 15 nt | 55 nt |
15% | 10 nt | 52 nt |
三、染色：
3.1 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）或核酸快速银染试剂盒（货号：RTS5101）进行染色。
1. 使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103）染色：
2. 使用核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）染色：
3 使用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）染色：
