一、细胞介绍

  细胞名称：NIT-1(小鼠胰岛素瘤β细胞)

  种属：小鼠

  年龄(性别)10周龄

  生长特性：贴壁

  生长培养基Ham's F-12K+10% heat-inactivated FBS+1% P/S

  培养条件气相：空气，95%;CO2.5%温度：37℃

  二、细胞处理：

  1) 冻存细胞的复苏：

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2) 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法

  1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL)，置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

  3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

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