名称TCCSUP(人膀胱癌细胞)(STR鉴定正确)

  别称TCCSuP;TCC-SUP;TCC Sup

  种属人类

  年龄（性别）女性，67岁

  组织来源膀胱

  生长特性贴壁细胞

  细胞形态上皮细胞样

  背景描述The TCCSUP line was isolated in 1974 from an anaplastic transitional cell carcinoma(TCC)in the neck of the urinary bladder.

  生物安全等级1

  生长培养基MEM＋10%FBS＋1%P/S

  推荐传代比例1:2-1:3

  推荐换液频率2~3次/周

  倍增时间~28小时(PubMed=3708594);46小时(PubMed=25984343);49.2小时(PubMed=26055179);~30-40小时(DSMZ).

  冻存条件

  冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO

  温度：液氮

  培养条件

  气相：空气，95%；CO2，5%

  温度：37℃

  抗原表达情况HLA 2,3,7,12

  保藏机构ATCC;HTB-5 DSMZ;ACC-377

  细胞处理：

  1）冻存细胞的复苏：

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法

  1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

  3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

  下面T25瓶为例；

  1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

  2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

  3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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