丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA检测服务

丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA检测服务实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。用纯化的植物丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙氨酸氨基转移酶(ALT)，再与HRP标记的丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA检测服务组成：

丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA检测服务样本处理及要求：

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

2. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性

丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA检测服务操作步骤

• 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为15ng/ml，10ng/ml ，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25 ng/ml）。
• 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
• 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
• 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
• 温育：操作同3。
• 洗涤：操作同5。
• 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 
• 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
• 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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