脾单核细胞分离实验操作方法：

采用颈椎脱臼法处死小鼠，于75%的酒精中浸泡10-15min；
在无菌超净台内分离脾脏，放入PBS溶液（按照1：50的比例加入双抗）中清洗2遍；
将清洗后的脾脏组织转移至离心管中，加入适量的RMPI-1640培养基，用剪刀将其剪碎成糜状；
将剪碎后的组织经200目的滤网过滤，得到脾细胞悬液；
另取一个离心管，先加入与细胞悬液等量体积的淋巴细胞分离液，之后将细胞悬液轻轻加到离心管的淋巴细胞分离液上层（注意45度倾斜沿管壁滴加，一定要缓慢否则悬液沉下去导致分层界面不明显）；
3000rpm离心10min，离心完毕后吸取中间白膜层即为脾单个核细胞；
3000rpm离心10min，加入RMPI-1640培养基进行洗涤一次；
用红细胞裂解液去除红细胞；3000rpm离心10min，再次用RMPI-1640培养基进行洗涤一次；
洗涤结束后，所得细胞沉淀用RMPI-1640培养基重悬后进行细胞计数。