产品名称：小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa试剂盒（如需其他种属如大小鼠，牛羊等，均有现货，具体咨询客服）

产品规格：96T

实验数量：可以做90个样本

采购优惠：订购即享折扣优惠，还能提供免费代测服务，详情咨询客服

产品存储：2-8℃

产品运输：顺丰快递

有效期：六个月

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中浓度。 
标本要求 
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa试剂盒样本处理方法
常规用于ELISA实验的样本包含血清、血浆、细胞培养上清、尿液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法存在差异，合适的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法。
1. 血清
血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。
使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室温下放置1小时或4℃过夜，分离出血清（建议倾斜试管或离心管以扩大液面的横截面，使血清可以更大程度地分离出来）。2-8℃下以1000×g离心20分钟，小心收集上清液（血清），立即进行测定。建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存，避免反复冻融。
在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确。另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。
2. 血浆
使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，2-8℃下以1000×g离心15分钟，小心收集上清液（血浆）。建议在-20℃或-80℃下将收集的血浆分装保存，避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。常见的抗凝剂包括EDTA钠盐，肝素钠，枸橼酸钠等。检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。
3. 细胞培养上清
将细胞培养上清液吸入离心管中，在2-8℃下以1000×g离心20分钟，除去细胞碎片和杂质，收集上清液备用，样本保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。
4.   细胞提取液
反复冻融方法
1） 吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，然后加入适量的培养基将培养板上的细胞冲洗干净。悬浮细胞可以省略该步骤。
2） 将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8℃下以1000×g离心5分钟，然后吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次。
3） 加入适量的预冷PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。在6孔培养板（约1×106个细胞）中，每个孔加入150-250μL的PBS来重悬细胞。
4） 使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞。
5） 2-8℃下以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
5. 组织匀浆
1） 用预冷的PBS（0.01M，PH7.4）冲洗组织以除去表面残留的血液或杂质（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果）。
2） 将组织块称重，然后切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆。
3） 加入适量的预冷PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
4） 将匀浆液吸入离心管中，2-8℃下以5000×g离心5分钟，收集上清液，保存至-20℃或-80℃，避免反复冻融。
6. 唾液
在2-8℃下，4000×g离心10分钟以去除杂质，取上清即可检测。建议使用新鲜的唾液样本检测。
7. 尿液
使用无菌容器收集尿液样本。在2-8℃下，1000×g离心15分钟以去除杂质，取上清即可检测。
8.   粪便
将粪便样本用PBS(0.01M, pH=7.4)重悬,置于冰上振荡15分钟,然后在2-8℃，5000×g离心5分钟，取上清即可检测。
10.植物样本处理：
植物组织的提取，不管是根茎组织还是叶片组织还是果实组织，都应该采用鲜重的计重方式，一般要遵循以下原则：
    1.称取的组织重量不能低于50mg。
    2.匀浆的比例按照10%，即1g组织加9ml的匀浆液，匀浆液一般选取PBS(PH=7.2-7.4)
    3.组织在匀浆器匀浆过程中，匀浆液应该分2次加进去，这样匀浆更充分。
    4.充分匀浆完成后离心取上清，离心机的转数选取2000-3000转每分，转数不宜超过5000.离心时间为15-30分钟。
11.细胞、细菌或组织样品的制备 ：
细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞 (功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次) ，之后置沸水浴振荡提取 10min ；10000g ，常温离心 10min ，取上清，冷却后待测。
组织：称取约 0. 1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min ，10000g， 常温离心 10min ，取上清，冷却后待测。

高品质的试剂，精确的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。其中正确的操作不仅仅是指实验操作，样本的处理也是至关重要的。我们希望两期关于样本处理方法的专帖能够有助于您的科研实验。如果您对于具体实验或者样本处理还有疑问或者建议，也欢迎您和我们联系:小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa试剂盒