| 规格编号 | 规格 | 库存 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 10437-1 | 100T | 现货 | 面议 |
大肠杆菌菌液直接PCR试剂盒
【产品内容】
组分 | 规格 |
2×直扩PCR Mix | 1 ml |
RNase-Free ddH2O | 1 ml |
【储存条件】
该试剂盒置于-20℃条件下可保存12个月。
【产品概述】
本产品为2×浓度的快速扩增PCR预混液，具有极高的扩增速度与稳定性。反应缓冲液针对菌落/菌液PCR优化，适合大肠杆菌来源的模板，是PCR鉴定实验的理想选择。本产品包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。产品中包含上样缓冲液，扩增产物无需额外添加Loading Buffer即可直接点样电泳。
【使用方法】
一、PCR 反应体系
组分 | 推荐用量 | 推荐终浓度 |
2×直扩PCR Mix | 10 μl | 1× |
0.5 μl | 0.2-0.4 μM | |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.2-0.4 μM |
模板DNA | 1 μl | |
ddH2O | 补足至20 μl |
注：各组分使用前应充分混匀。
a.引物终浓度：推荐每条引物使用终浓度为0.4 μM，引物使用量太多会导致非特异性扩增增加，使用量过少则会导致扩增失败或产量低。
b.模板使用量
菌液：建议取用量为1 μl菌液为模板
菌落：可直接挑取单菌落于反应液中，或将菌落溶解于10-20 μl无菌水中，混匀吸取1 μl为模板
c.反应体系：推荐使用20 μl，也可根据使用习惯调整体系体积大小。
d.体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
二、PCR 反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 cycle |
变性 | 98℃ | 15 sec | |
退火 | 56℃ | 15 sec | |
延伸 | 72℃ | 15 sec/Kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 cycle |
*退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值2-5 ℃，或通过梯度PCR确定最佳温度。
【琼脂糖凝胶电泳】
PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳（无需加入Loading Buffer）。
【对照反应】
在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
【注意事项】
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。
2. 本产品仅作科研用途！
