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T5核酸外切酶沿5’→3’方向降解DNA，它可降解双链DNA、单链DNA和缺刻的质粒DNA。它既能从5’-末端起始降解DNA，也能从线性或环状双链DNA的切刻或缺口处起始降解DNA，但不能降解超螺旋双链DNA。基于以上特性，T5核酸外切酶可应用于Gibson组装。
单位定义
1单位指在50μl反应体系，37℃条件下，30分钟内能从双链DNA底物上催化产生1nmol的酸可溶性脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。
组分
名称 数量
T5 Exonuclease (10U/μl) 100μl
10×T5 Exo Buffer 1ml
储存
置于-20°C，可保存3年。
使用注意事项
（1）1× T5 Exo Buffer：50mM KAc，20mM Tris-Ac pH 7.9，10mM Mg(Ac)2，1mM DTT。该酶在PCR Buffer中也具有活性。
（2）该酶的最佳反应温度为37°C，在50°C也具有一定活性，因此可用于Gibson组装。
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