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T4多聚核苷酸激酶能够催化ATP的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的 5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶还具有3’磷酸酶活性,将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该酶经修饰后,其3’磷酸酶活性缺失,但仍保留了所有激酶的活性。
组分
组分名称 数量
T4 Polynucleotide Kinase (10 U/μl) 100 μl
10×T4 PNK Buffer 0.5 ml
10mM ATP 100 μl
应用
DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化,以便进行连接反应。
DNA 或 RNA 的末端标记,用作探针和进行 DNA 测序
将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´ 磷酸化,制备pNp 底物,用于添加到 DNA 或 RNA的 3´ 端
对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记
活性定义
1 单位指 37℃条件下,30 分钟内催化1nmol 酸不溶性[32P] 掺入所需要的酶量。
储存
-20℃可保存2年。
其他注意事项
(1)该酶经功能性验证具有解旋活性,解链5’突出末端dsDNA活性最高,3’突出末端dsDNA稍弱,平端dsDNA最弱。
(2)测试反应条件为, 0.1pmol/ul的dsDNA, 20mM Tris-HCl,pH7.6, 50mM KCl, 10mM Mg2+, 1mM ATP。
(3)该酶不提供反应Buffer,需要根据特定实验自行准备。
(4)更高浓度的酶制品,请来信询问索取。
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