产品名称：荧光素FITC标记链霉亲和素
产品规格：100ul/200ul(部分有50ul，如需更大包装或其他具体规格，请咨询客服)
研究领域：肿瘤  细胞生物  免疫学等  
抗体来源：咨询客服
克隆类型：Polyclonal
交叉反应：Human,Mouse,Rat,Dog,Pig,Cow,Rabbit,Sheep,
产品应用：WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1μg/Test IF=1:100-500 （石蜡切片需做抗原修复）
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
性    状：Liquid
浓    度：1mg/ml
免 疫 原：KLH conjugated synthetic peptide derived 
亚    型：IgG
纯化方法：affinity purified by Protein A
储 存 液：0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

荧光素FITC标记链霉亲和素,Western Blot抗体杂交:
孵育一抗
A. 先将需要检测的抗体准备好,并决定好它们的稀释度。
B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀释好抗体。注意,如需高比例稀释,采用梯度稀释。
C. 将稀释好的抗体和膜一起孵育。 一般采用RT 1小时,可根据抗体量和膜上抗原量适当延长或缩短时间。
注意:为了便于后面分析结果,我们一般会选用已确定分子量大小
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗体Phospho-MKP1(Ser359)免疫标记  细胞分裂周期蛋白7抗体Cdc7免疫标记步骤(以石蜡切片为例)

仪器、设备:
移液枪、免疫组化笔、水浴锅、计时器、孵育湿盒、切片架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶等。

荧光素FITC标记链霉亲和素操作步骤
1.脱蜡水化。将石蜡切片置于新鲜二甲苯脱中浸泡 15 分钟,重复三次。去除多余的液体后,依次置于无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡 5 分钟,蒸馏水(或自来水)冲洗 5 分钟。用 PBS 缓冲液(试剂 1,将干粉溶解于 1L 去离子水中)冲洗切片 5 分钟,重复三次。
2.抗原修复。将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯(或修复盒)中的耐高温塑料切片架上,加适量修复液 1× 柠檬酸钠抗原修复液(试剂 2,将 100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成 1×柠檬酸钠抗原修复液),液面要浸过切片组织一定高度,将修复盒置于沸水中煮沸修复 15 分钟后取出玻片,自然凉至室温。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
注意:抗原修复时,修复液务必保证切片始终浸泡在液体内,一般情况:修复液的量约为 800mL/1 架。
3.阻断内源性过氧化物酶。用吸水纸擦干玻片,免疫组化笔在组织周围画圈,滴加 50μL 内源性过氧化物酶阻断剂(试剂 3)到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育 30 分钟,用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
4.血清封闭。用吸水纸擦干玻片,滴加 50μL 正常山羊血清工作液(试剂 5),37℃封闭 20 分钟,以减少非特异性染色。
5.一抗孵育。用抗体稀释液(试剂 4)将一抗原液稀释成工作液,用吸水纸擦干玻片组织周围的液体,滴加适量抗体工作液,置于湿盒 4℃孵育过夜或 37℃孵育 1h-2h。
6.复温。4℃过夜后从冰箱拿出样本,在室温下孵育 15min 复温(抗体孵育为 4℃过夜选用此步骤,如室温孵育直接进入下一步清洗)。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
7.二抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 生物素标记的羊抗兔 IgG(试剂 6),37℃孵育 20  分钟,用 PBS缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
8.三抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 辣根酶标记的链酶卵白素孵育(试剂 7),37℃孵育 20  分钟,用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
9.显色。甩去 PBS 缓冲液,吸水纸擦干切片; 每张切片滴加新鲜配制的 DAB 工作液 50μL(试剂 8:试剂 9:试剂 1=1:1:18  比例配置),孵育 3-5min,光学显微镜下观察染色结果,切勿显色过深;显色后用自来水冲洗切片终止显色。
10.复染。滴加适量苏木素染液(试剂 10)复染,孵育 1-5 分钟,自来水冲洗 5 分钟,滴加盐酸酒精分化液分化 30 秒,自来水冲洗。
11.脱水封片。将玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇,各浸泡 5 分钟, 再将玻片放入二甲苯中浸泡 15 分钟,重复三次。玻片取出来稍晾干,用中性树胶封片。
结果判断
在光学显微镜下对染色的切片观察并判断。苏木素染细胞核为蓝色,DAB 显色的阳性表达为棕黄色。

上海雅吉生物公司提供的标签抗体为小鼠IgG单克隆抗体，可结合6xHis-, GFP-, GST-, D*-, HA-,及Myc-标记的融合蛋白。本抗体可通过western blots、免疫染色或免疫共沉淀鉴定或获得融合蛋白。这种固化抗体也可以用于对带标签融合蛋白的亲和纯化。搭配多种融合标签可选的ORF表达克隆使用，可获得最佳实验效果。抗标签抗体使用含特异融合标签合成肽的免疫小鼠制备。它们可识别受转染的哺乳动物细胞或其它表达系统中，N端或C端带标签的过表达重组蛋白。

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