产品简介：

安特柏小鼠抗体纯化试剂盒用于纯化小鼠血清,腹水和含有鼠源抗体的制品;本试剂盒配备了纯化小鼠抗体所必需预装柱及核心试剂。

产品优势：

本试剂盒中预装柱的填料为Protein G Beads 4FF， 主要优势如下：

Ø  Protein G Beads 4FF可以耐高压,可以在高速流速状态下纯化；

Ø  洗脱条件温和，不会对抗体造成损伤；

Ø  填料再生简单，反复使用，实验室测试表明再生15次后，Protein G Beads 4FF填料效率没有明显降低。

产品信息：

基质：交联度4%琼脂糖凝胶

配体：重组蛋白G

载量：>30 mg Mouse lgG /ml 介质

介质微球粒径：45-165um

最大流速：300cm/h

储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS

储存温度：2-8℃

产品组分：

其他需要自备试剂材料：

²  待纯化抗体样品；

²  移液器及吸头；

²  去离子水；

²  0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

使用方法：

1.使用前准备

1）缓冲液的准备

基础缓冲液:

按照实验所用量，取试剂盒中浓缩基础缓冲液，加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液；

洗脱液:

a.试剂盒提供的洗脱干粉用10ml无菌去离子水溶解并混匀，即为10X 洗脱液溶液。配制好的10X 洗脱溶液-20ºC保存，至少一年有效。

b.洗脱缓冲液的配制：a步骤配好的10X洗脱液, 加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱缓冲液。配制好的洗脱缓冲液4ºC保存，两周内有效；

缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

2）样品准备样品

使用上述基础缓冲液制备上样样品（细胞/细菌裂解液），样品在上样前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，防止堵塞柱子。

3）ANTBDY®Protein G Beads 4FF纯化柱的准备

取出试剂盒中预装柱平衡到室温，打开纯化柱底部开关，用3-5个体积去离子水冲洗柱床，随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子，确保柱床无气泡。

2.从样品中纯化目标蛋白

1）使用蠕动泵上样或者直接上样（重力法）；

上样量不要超过柱子的结合能力。

2）上样完毕后，用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要10-15个柱体积）；

3）使用洗脱液洗脱目的抗体，顺次接收并做好标记，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要5-10个柱体积）；

4）SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品（包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品,纯化样品根据后续实验进行透析浓缩等。

3.纯化柱清洗、再生与保存。

1）5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗；

2）3倍柱床体积的去离子水清洗；

3）5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液；

4）3倍柱床体积去离子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。

仅供科研实验使用