产品简介：

His标签蛋白纯化试剂盒用于纯化各种表达系统中含有His标签的重组蛋白，包括大肠杆菌表达系统、哺乳动物表达系统、酵母表达系统等等;本试剂盒配备了纯化蛋白所必需预装柱及核心试剂。

产品优势：

1.      本试剂盒中预装柱的填料为Ni Beads 4FF。主要优势如下：

2.      Ni Beads 4FF这个纯化可以耐受变性剂，在高浓度尿素和盐酸胍里仍然可以轻松挂柱，纯化包涵体不是障碍；

3.      洗脱条件温和，不会对蛋白造成造成损伤；

4.      填料再生简单，反复使用，实验室测试表明再生15次后，Ni Beads 4FF填料效率没有明显降低。

产品参数：

基质：交联度4%琼脂糖凝胶

配体：Ni

载量：>10mg His标签蛋白

介质微球粒径：45-165um

最大流速：300cm/h

主要组分：

其他需要自备试剂材料：

1.      待纯化蛋白样品；

2.      移液器及吸头；

3.      去离子水；

4.      0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

产品储存：

储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS

储存温度：2-8℃，12个月

使用方法：

1.使用前准备

1）缓冲液的准备

基础缓冲液:

按照实验所用量，取试剂盒中浓缩基础缓冲液，加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液；

洗脱液:

按照实验所需用量，取试剂盒中浓缩洗脱液，加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱液；

缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

 2）样品准备样品

使用上述基础缓冲液制备上样样品（细胞/细菌裂解液），样品在上样前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，防止堵塞柱子。

 3）Ni Beads 4FF纯化柱的准备

取出试剂盒中预装柱平衡到室温，打开纯化柱底部开关，用3-5个体积去离子水冲洗柱床，随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子，确保柱床无气泡。

2.从样品中纯化目标蛋白

1）使用蠕动泵上样或者直接上样（重力法）；上样量不要超过柱子的结合能力。

2）上样完毕后，用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线

（一般需要10-15个柱体积）；

3）使用洗脱液洗脱目的蛋白，顺次接收并做好标记，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线

（一般需要5-10个柱体积）；

4）SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品（包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品。

3.纯化柱清洗、再生与保存。

1）5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗；

2）3倍柱床体积的去离子水清洗；

3）5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液；