产品简介：

ANTBDY® 荧光染料为活性荧光染料，该系列包括从紫外、可见光谱到近红外光谱常见荧光染料，通过荧光素集团的活性键与生物分子的游离氨基共价结合，用于标记抗体、蛋白质。

产品优势：

▲    对核心结构的创新性修改使得ANTBDY ® Cy5染料优于具有许多创新新颖特征的其他商业染料，标记效率更高，发光度更强。

▲    ANTBDY®Cy5是一种荧光染料，其激发波长和发射波长分别为646nm和664nm，它与抗体形成更特异的抗体荧光素结合物，背景较更低。

▲    ANTBDY ®Cy5荧光染料为预先活化干粉，使用方便快捷，60-90分钟可以轻松完成标记

▲    本试剂盒常被用于抗体的直接标记，省却了二抗的使用和其相应的操作步骤。

▲    标记产物在含有防腐剂的保存液中可以放置在 4˚C至少保存1个月以上，-20℃可长期保存。

主要组分：

其他需要自备材料：

ü   待标记的生物分子

ü   移液器及吸头.

ü   37℃恒温箱

ü   离心机

ü   去离子水.

ü   PBS (pH 7.4)

储存条件：

本试剂盒低温运输，收到后请置于-20˚C可保存6个月以上。

重要提示：

1.    本试剂盒所配置的活化Cy5荧光染料为干粉，可放置4˚C或者-20˚C长期保存，使用时加入试剂盒所配的DMSO溶解即可用于标记，溶解后的Cy5荧光染料不可保存下次使用，建议一次性使用完；

2.    本试剂盒所配置的超滤管默认截留30k MWCO,适合于抗体，如果需要标记其他分子量蛋白类物质请与我们联系，给您配置相应分子量截留超滤管（您的待标记物质分子量必须大于超滤管截留分子量的2倍以上）；

3.    本试剂盒所推荐的抗体标记量仅供参考，如有更高要求需要实验者具体摸索优化，建议按照推荐最低量进行标记实验。

4.    对待标记抗体、蛋白质的要求：

ü   待标记物以0.01M pH7.4 PBS环境为佳，不应含有甘油、BSA、叠氮钠、氨基物质（包括甘氨酸、Tris 等），EDTA等物质。如果含有以上小分子物质，需用0.01M pH7.4 PBS 缓冲溶液进行充分透析、脱盐柱脱盐或者超滤管超滤置换溶液以除去干扰小分子，如果含有保护性蛋白BSA等需要想办法将其分离去除；

ü   调整待标记物至适当的浓度，抗体调整的浓度为2-10mg/mL为宜；对于小分子物质需要实验者摸索浓度，保证荧光素的比例过量。

ü   最佳标记反应条件为试剂盒所提供的标记缓冲液环境，尽可能在标记前将待标记物溶液环境置换为标记还缓冲液；

ü   如果待标记物溶液中有不溶物、有块状物或者沉淀请离心或者过滤除掉。

使用方法：

Ø  试剂准备

待标记的生物分子与荧光素最佳摩尔比例为1:8~1:25,本试剂盒推荐最佳比例为1:15（按照本试剂盒操作荧光素干粉加入相应量DMSO溶解后的荧光素浓度770uM(nmol/ml),通常1mg/ml抗体(分子量150kDa)的浓度为6.67uM(nmol/ml)；为了获得最佳的摩尔比例，可以要通过预实验进行摸索。以抗体标记为例，推荐量如下。最佳标记体系应保证抗体的浓度为2mg/ml，标记时终浓度不低于1mg/ml。对于其他标记量，参照表按等比例调整抗体的体积和用量。

Ø  样品准备

待标记的分子浓度不低于2 mg/ml，如果浓度较低，需在实验之前浓缩到2mg/ml以上；待标记的分子需要溶解在符合以下要求的缓冲液中，如果符合以下要求可以直接进行标记，如果不符合请将溶液置换（透析或者超滤）到符合要求的溶液中在进行标记实验。

Ø  操作流程(以标记100ug抗体为例，浓度为2mg/ml)

1)      将待标记抗体溶液置换成标记缓冲液，或者加入1/10体积标记缓冲液，用移液器轻轻混匀；

2)      取20ul(按照抗体与荧光素摩尔比=1:20)活化的Cy5溶液加入到上述步骤混匀的抗体中，轻轻混匀，37℃ 避光反应1小时；

3)      反应完毕，将适量的PBS（约450uL）加入到步骤2)的混合溶液中，轻轻混匀并将溶液移至超滤管芯，4℃ 12000rpm离心5min；

4)      离心完毕，取出管芯将外套管内溶液弃掉，管芯重新插入外套管，在管芯内重新加入适量的PBS（约450uL）4℃ 12000rpm离心5min；

5)      重复步骤4）5次以上；

6)      将超滤管芯内溶液轻轻混匀并吹打管心内壁，并转移到干净避光离心管，此即为荧光素标记产物。

Ø  标记产物的保存

根据实验需要调整到合适的浓度，可加入适量BSA，甘油及防腐剂等，分装成小分-20℃避光保存；也可以将试剂盒附带的标记物保存液与标记产物按照体积比1：1混匀后，即可分装保存。

常见问题及解决办法：

Q: 待标记分子经过浓缩浓度仍然达不到2 mg/ml，再浓缩就产生沉淀了怎么办?

A: 标记的时候尽可能达到这个浓度，如果实在达不到这个浓度，适当增加加入的活化的荧光素的量；最佳标记效果可以梯度增加荧光素用量试验测试来确定。

Q: 待标记分子与荧光素的最佳摩尔比只能是1:8 - 1:25之间？

A:这个要根据不同生物分子性质确定，更准确的说与生物分子表面氨基个数有关系；最佳标记比例可根据梯度用量测试确定。

Q: 如果选择标记试剂盒中的超滤管型号?

A:一般来说，您待标记生物分子的分子量是超滤管截留分子量的2倍以上最好；比如，标记抗体，抗体分子量为150Kd,选择分子截留75kD以下的都可以，分子量截留越小，超滤越慢。如果分子量太小，标记完 以后建议用更高精度的纯化方式，比如，10kD分子量建议用HPLC纯化

*本试剂仅供实验室研究使用