基本描述

规格或纯度：EnzymoPure™, ≥95%(SDS-PAGE), other protease activity not detected.

产品介绍：

产品介绍：

阿拉丁生产的重组SENPEUH蛋白酶(His-tag)，即Recombinant SENPEUH (His-tag)或rSENPEUH (His-tag)，是一种通过E. coli 重组表达经人工改造的新型SENP蛋白酶，理论分子量为25.7kDa，主要用于切除酵母或真核细胞体系融合表达的重组蛋白的SUMOEU1标签。SUMOEU1标签作为SUMO的突变体，在酵母和真核细胞中可以提高目的蛋白的可溶性和稳定性，而且SUMOEU1标签融合的目的蛋白不参于SUMO相关的细胞调控，也不会被内源性的去SUMO化酶切割，因此SUMOEU1标签适用于酵母和真核细胞重组蛋白的表达和纯化。rSENPEUH高度特异性地识别并切割SUMOEU1标签，实现SUMOEU1标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留1]。本产品N端带有His-tag，可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。本产品酶切SUMOEU1标签融合蛋白的效果参考图1。图1. 阿拉丁生产的重组SENPEUH蛋白酶(His-tag) 酶切SUMOEU1-MBP蛋白的效果图。在30μl反应体系中，加入10µg SUMOEU1-MBP及相应量的本品，25℃孵育1小时后，加入7μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) ，95℃加热5分钟，使用UltraBio™ Plus PAGE预制胶进行电泳检测，UltraBio™考马斯亮蓝超快染色液进行染色，可以观察到随着重组SENPEUH蛋白酶的酶量增加，SUMOEU1-MBP被酶切的越来越完全。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。本产品的基本信息如下表：rSENPEUH最佳酶切温度为25℃，在较宽的pH范围(6.0-10.0)、较宽的温度范围(2-37℃)、较宽的离子强度范围(0-1M NaCl，0-500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中，建议4℃酶切过夜以尽可能保持重组蛋白的活性。rSENPEUH在0.5-2mM DTT存在的情况下酶活性更高，建议酶切体系中加入适当浓度的DTT以提高酶切效率。 rSENPEUH的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor)如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-4、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制rSENPEUH的酶活力。本产品用于移除重组蛋白SUMOEU1标签的酶切反应时，如果按照100μg SUMOEU1标签融合的重组蛋白使用1μl rSENPEUH (10U/μl)，并4℃酶切过夜，本产品的500U、2KU、10KU和50KU包装，分别可用于约5mg、20mg、100mg和500mg带有SUMOEU1标签融合重组蛋白的酶切。

注意事项：

本产品含50%甘油，-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，冻融可能会降低本产品的酶活性。本产品较为粘稠，吸取时需注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。本产品的酶活性与SUMOEU1标签和目的蛋白形成的融合蛋白的空间结构有较大的相关性，实测对于一些SUMOEU1标签融合蛋白的活性可以达到说明书标注的活性，但对于某些SUMOEU1标签融合蛋白的酶切活性会差别比较大。对于遇到本产品酶活性相对较低的情况，需要大幅度加大酶的用量。如果希望获得更高的酶切活性，此时建议在许可的范围内适当增减或变更目的蛋白与SUMOEU1标签连接处的氨基酸序列，以获得更好的酶切效果。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.酶切条件的优化。由于不同SUMOEU1标签融合的重组蛋白具有不同的特性，为获得比较理想的实验效果，建议对酶和待酶切的SUMOEU1标签融合蛋白的使用比例进行适当优化，按照如下步骤摸索rSENPEUH的理想用量。a.取1μl rSENPEUH (10U/μl)加入到9μl Reaction Buffer (需用户自备)中，将rSENPEUH稀释至1U/μl。注：由于rSENPEUH在较宽的pH范围(6.0-10.0)，较宽的温度范围(2-37℃)，较宽的离子强度范围(0-1M NaCl，0-500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性，因此对Reaction Buffer组分不作特定限制，但是在0.5-2mM DTT存在的情况下rSENPEUH的酶活性更高，可根据实验需要决定酶切体系中是否加入适当浓度的DTT。b.请参考下表在1.5ml离心管中配制反应体系。 Component Volume SUMOEU1-tag Protein (10μg) xμlrSENPEUH (1U/μl)0, 1, 5 or 10μlReaction BufferTo 20μlc.进行酶切反应。温度与时间可以视情况进行适当调整，具体请参考下表。 Temperature Time 4℃overnight16℃4h25℃2h37℃1hd.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) ，混匀后95℃加热5分钟，使用 Plus PAGE预制胶进行电泳检测并使用考马斯亮蓝染色。e.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，SUMOEU1标签被完全切除是比较理想的rSENPEUH酶用量，可按照等比例放大应用到后续的酶切反应中。f.如按照上述操作，SUMOEU1标签没有被完全切除，可以尝试增加rSENPEUH酶用量，延长酶切时间或提高酶切温度，以获得最佳的酶切效果。2.酶切与纯化。后续可以按照上述优化的反应条件，放大反应体系进行目的蛋白SUMOEU1标签的切除反应。反应结束后，可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMOEU1标签，以及带有His标签的本产品重组SUMOEU1蛋白酶，从而获得高纯度的去除了SUMOEU1标签的目的蛋白。也可以对于同时带有His标签的SUMOEU1标签的融合表达蛋白进行在柱酶切，即在镍柱或GST柱结合带有His标签的SUMOEU1标签的融合蛋白时，进行rSENPEUH (His-tag)的酶切，酶切后如果镍柱容量足够，rSENPEUH (His-tag)和酶切下来的带有His标签的SUMOEU1标签都会结合在镍柱上，仅目的蛋白会被洗脱下来。参考文献：1.Vera Rodriguez A, Frey S, Görlich D. J Cell Biol. 2019. 218(6):2006-2020.

级别：EnzymoPure™

产品规格参数

浓度：other protease activity not detected.

储存温度：-20°C储存

运输条件：超低温冰袋运输

稳定性与储存：-20℃保存，两年有效。

查看阿拉丁官网此产品相关对应页面：http://www.aladdin-e.com/zh_cn/R752160.html