在结合Ca²⁺后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca²⁺浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2最常用。但是，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且细胞钙反应非常小。Rhod-4 的开发旨在改善Rhod-2细胞的负载和钙反应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM的细胞钙反应敏感性比Rhod-2 AM高10倍。