细胞发生凋亡时, 会激活一些 DNA 内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA,产生 180 bp-200 bp 的 DNA 片段,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现的特异的梯状 Ladder 图谱。基因组 DNA 双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性 3'- OH 末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化作用下,与生物素(Biotin)-dUTP 结合,从而通过光学显微镜直接进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂,因而没有 3'-OH 形成,很少能够被染色。Tunel 法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中广泛采用。
本试剂盒应用范围广,可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。可选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。
组分信息:
| 序号 | 组分名称 | 50T |
| A | Biotin TUNEL Reaction Buffer | 2×1.25 mL |
| B | TdT酶 | 50uL |
| C | Streptavidin-HRP | 50uL |
| D | Streptavidin-HRP稀释液 | 2×1.25mL |
| E | DAB显色液A | 250uL |
| F | DAB显色液B | 2×1.25mL |
| G | DAB显色液C | 125uL |
| H | Proteinase K (2 mg/mL) | 100uL |
| I | DNase I (2 U/μL) | 13uL |
| J | 10 × DNase I Buffer | 260uL |