ELISA实验中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)检测试剂盒应该包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
(一)抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度(参考:5ug/ml),加入酶标板(50ul/孔),以胶带封口,于4℃过液。
2.弃抗体液,以双蒸水冲洗3次,自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板,备用。
(二)底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物(参考:5mg/10ml),加入酶标板中(50ul/孔),以胶带封口,37℃避光保存2h,在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
(三)酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本,加至已包被抗体的酶标板中(50ul/ 孔);用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数(参考:40~4000倍),同时加入酶标板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次,然后于吸水纸上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)检测试剂盒相关产品如下:ybA118Hu 人CD30配体(CD30L)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 30 Ligand (CD30L)
ybA119Hu 人CD40配体(CD40L)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 40 Ligand (CD40L)
ybA120Hu 人干细胞因子(SCF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Stem HZll Factor (SCF)
ybA121Hu 人干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Stem HZll Factor ReHZptor (SCFR)
ybA122Hu 人基质细胞衍生因子1(SDF1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Stromal HZll Derived Factor 1 (SDF1)
ybA123Hu 人转化生长因子α(TGFα)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Transforming Growth Factor Alpha (TGFa)
ybA124Hu 人转化生长因子β1(TGFβ1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 1 (TGFb1)
ybA125Hu 人免疫球蛋白样EGF样域酪氨酸激酶1(Tie1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tyrosine Kinase With Immunoglobulin Like And EGF Like Domains Protein 1 (Tie1)
ybA126Hu 人内皮细胞TEK酪氨酸激酶(Tie2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for TEK Tyrosine Kinase, Endothelial (Tie2)
ybA128Hu 人组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 2 (TIMP2)
ybA129Hu 人组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 3 (TIMP3)
ybA130Hu 人组织金属蛋白酶抑制因子4(TIMP4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 4 (TIMP4)
ybA133Hu 人肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFa)
ybA134Hu 人肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb)
ybA135Hu 人血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thrombopoietin (TPO)
ybA140Hu 人尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Plasminogen Activator, Urokinase (uPA)
ybA141Hu 人尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Plasminogen Activator, Urokinase ReHZptor (uPAR)
ybA142Hu 人细胞间粘附分子5(ICAM5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for InterHZllular Adhesion Molecule 5 (ICAM5)