本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗大鼠VEGF单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的VEGF会与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗大鼠VEGF抗体和辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合；抗大鼠VEGF抗体与结合在单抗上的大鼠VEGF结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。 加入显色底物，若反应孔中有VEGF，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测OD值，VEGF浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中VEGF浓度。