| 操作步骤 | |
| 1. 估计DNA反应液的体积，如果回收片段<100 bp， 加入10倍体积的Buffer 1#（如PCR反应体系为50µl，则加入500µlBuffer1#）；如果回收片段≥100 bp，则只需要加入5倍体积的Buffer1#（如PCR反应体系为50µl，则加入250µlBuffer1#）。 |
| 2. 柱平衡：向已吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)加入200 μl Buffer 2#，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 3. 将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min。 |
| 注意：吸附柱容积为700 µl，若样品体积大于700 µl 可分批加入 。 |
| 4. 离心后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 注意：对于含有放射性的样品，离心后，将装有废液的收集管弃掉，将吸附柱放入新的收集管中。 |
| 5. 向吸附柱中加入600 µl Buffer 3# （使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000rpm离心1min， 倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 注意：对于含放射性的样品，向吸附柱中加入450 µl Buffer 3# （请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1min。将废液弃掉，将吸附柱重新放回收集管中，重复操作一次。 |
| 6. 12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 |
| 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 |
| 7. 将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加100-200 µl Buffer 4#，室温放置2min，12,000rpm离心1min收集DNA溶液。-20℃保存DNA。 |
| 注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。 |
| 2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤7。 |
| 3）洗脱体积不应小于100μl，体积过少会影响回收效率。 |
| 4）如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。 |
| 5）回收大于10kb的DNA片段时，Buffer 4#应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。 |
