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宁波明舟生物科技有限公司
AML-12 小鼠肝实质细胞
AML-12 小鼠肝实质细胞
价 格:
¥1
品 牌:
mingzhoubio
最新更新日期:
2021-06-17 08:54
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宁波明舟生物科技有限公司
我要认领
公司:
宁波明舟生物科技有限公司
联系人:
梅梓铭
联系电话:
17280875617
0574-87157013
联系邮箱:
mingzhoubio@163.com
QQ:
1438578920
产品属性
供应商
明舟生物
数量
1*10^6
英文名
AML-12
生长状态
良好
运输方式
干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25细胞瓶)
器官来源
小鼠
物种来源
小鼠
组织来源
小鼠肝
产品说明
细胞污染
:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
培养基
:D/F12+10%FBS+1%ITS(10ug/mL胰岛素;转铁蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒)+40ng/ml地塞米松+1%P/S
培养条件
:Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃
细胞冻存
:Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%(for reference)Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
细胞传代步骤
:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞复苏步骤
:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤
:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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