无血清细胞冻存液（无蛋白）

价格：￥499

品牌：朗妙

最新更新日期：2021-06-17 08:57

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朗智（上海）生物科技有限公司

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产品属性

英文名	Serum free cell cryopreservation solution(protein free)

保质期

12个月

供应商	朗智（上海）生物科技有限公司

保存条件

2-8℃，避光保存

规格

100ml

产品说明

产品概述
无血清细胞冻存液（无蛋白）Serum free cell cryopreservation solution(protein free)，是一款普遍适用于多种哺乳动物细胞低温冷冻保存的即用型细胞冻存液，经验证本品适用于人间充质干细胞（hMSC）、中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、外周血单核细胞（PBMC）、人胚肾细胞（HEK293）等类型细胞的冻存。本品化学成分明确，不含有任何蛋白成分，可排除血清或蛋白潜在的病原体或免疫反应风险，使用更安全，并能够保持多种细胞的复苏活率在90%以上。

产品规格及存储条件

货号	名称	规格	存储条件	有效期
LMCE007	无血清细胞冻存液（无蛋白）	100ml	2-8℃，避光保存	12个月

产品原理
我公司推出的无血清细胞冻存液（无蛋白），通过冷冻保护剂保护细胞，冷冻保护剂与水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程，使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤，进而保持细胞在低温状态下稳定存活。

产品特点
·安全：无蛋白，无动物源成分，化学成分明确；
·广谱：普遍适用于多种类型细胞系（如 hMSC、PBMC、CHO、HEK293 等）；
·高效：细胞复苏率高，多种细胞的复苏活率在 90% 以上；
·方便：即用型，无需额外配制；
·简捷：可适用于细胞冻存多种简化操作，可适用非程序化冻存，亦可适用-80℃环境保存。

操作方法
一、细胞冻存
以下操作以脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的冻存为例简述细胞冻存液的操作方法，hUC-MSCs 的培养推荐使用无血清培养基培养（LANGMIAO，LMCE007）。
1. 将生长状态良好的 hUC-MSCs，用重组胰蛋白酶消化2min，用胰蛋白酶抑制剂终止消化，重悬细胞，300g离心5分钟，弃上清;
提示：对于悬浮培养细胞，可直接离心收集细胞。
2. 加入适当体积的PBS重悬细胞，细胞计数，计算细胞总量；
3. 再次以300g离心5min收集细胞，弃上清；
4. 根据冻存密度需要，添加适量无血清细胞冻存液（无蛋白），反复吹吸4-5次使细胞分散均匀，重悬细胞；
提示：冻存密度可根据需要调整，贴壁细胞冻存密度推荐0.5-5×106 /mL，悬浮细胞如CHO等推荐0.1-2×107 /mL。
5. 将细胞悬液转移至冻存管内，旋紧管盖，做好标记；
6. 将冻存管放入程序降温盒（LANGMIAO，LMCE007）内，转移至-80℃冰箱过夜（或储存6h以上）；
7. 将细胞冻存管从-80℃冰箱内取出，迅速转移至-196℃液氮或气象罐中长期保存；
提示：对于较长期保存细胞，建议每5-10年复苏鉴定细胞状态。

二、细胞复苏
1. 复苏准备：开启水浴锅，调整温度，使水浴锅内水温稳定在37℃；细胞培养基37℃预温；确认细胞存放的位置；
2. 取出细胞，确认标签，迅速转移至37℃水中，不断摇动冻存管并观察其中的冰块解冻情况（约需要 2-3min）；
3. 当冻存管中的冰块即将完全融化时，将其从水浴锅中取出，用75%酒精充分清洁外表面后，移入生物安全柜或超净工作台内；
提示：摇动时避免水浴浸没冻存管盖；尽量缩短解冻时间；避免冻存管内冻存液溶解后升温。
4. 用75%酒精棉球再次清洁冻存管口、管壁；
5. 打开冻存管，用移液器轻柔混匀后，将细胞悬液转移至预温的完全培养基内，轻柔吹打悬液，使细胞混合均匀；
提示 1：逐滴加入，或轻柔操作，每毫升冻存液推荐加入至5-10mL完全培养基内。
提示 2：洗涤并收集冻存管内残液，有利于提高珍贵细胞回复苏收率。
6. 280g离心5min，收集细胞，弃上清；
7. 加入适量培养基再次重悬细胞，进行细胞计数，计算细胞密度；
8. 按照细胞类型或研究需要，接种适当密度的细胞至合适的培养器皿内，摇匀后，转移至培养箱中培养。

相关数据

细胞附着和状态

图1 无血清细胞冻存液（无蛋白）冻存脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）细胞形态特征

冻存前细胞形态；B.无血清细胞冻存液（无蛋白）冻存细胞形态；C.含血清冻存液冻存细胞形态特征细胞复苏24h后进行观察，图片在10X物镜下拍摄

复苏存活率

图2 无血清细胞冻存液（无蛋白）冻存脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）细胞复苏活率

含血清细胞冻存液（含 10%FBS，10%DMSO及 80%DMEM/F12）；B.某进口商业化竞品； C.无血清细胞冻存液（无蛋白）；hUC-MSCs液氮内存储 120h以上，进行细胞复苏，细胞冻存密度 1×106/mL。

复苏后回收率

图3 无血清细胞冻存液（无蛋白）冻存 hUC-MSCs细胞复苏情况
细胞复苏0h、24h、48h计数，统计活细胞总数对比，A.含血清细胞冻存液（含 10%FBS，10%DMSO 及 80%DMEM/F12）；B.某进口商业化竞品；C.无血清细胞冻存液（无蛋白）；hUC-MSCs液氮内存储 120h以上，进行细胞复苏，细胞冻存密度 1×106/mL。

注意事项
1. 本品使用请在无菌环境下进行。
2. 本品存储于 2-8℃环境，避光保存，即用型，使用时取出即用，请勿 37℃预温或长时间室温放置。
3. 本品使用推荐程序化冷冻，也适用于即用型非程序化冷冻使用。
4. 本品细胞冻存推荐：长期保存，推荐冻存于液氮罐或气象罐的-196℃环境；短期保存也可置于-80℃ 环境。
5. 本品不含任何抗生素，长期使用，反复开启瓶盖，增加本品被染菌的风险，建议分装使用。
6. 本产品含有 DMSO 成分，操作时应做好防护措施，穿好实验服并佩戴好手套和口罩。
7. 请在产品有效期内使用。

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