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北京吉田生物科技有限公司
实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR
价 格:
¥100
最新更新日期:
2021-06-17 09:19
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北京吉田生物科技有限公司
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公司:
北京吉田生物科技有限公司
联系人:
钱维炳
联系电话:
15724763792
400-8837905
联系邮箱:
market@jitianbio.com
QQ:
3040758494
产品属性
提供商
北京吉田生物科技有限公司
服务名称
实时荧光定量PCR
规格
次
产品说明
技术原理
PCR
技术利用荧光基团标记的反应体系,实时监测
PCR
进程中的荧光信号累积,检测
PCR
扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过
Ct
值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
服务优势
ABI
的
qPCR system
,灵敏,准确;
Qiagen
等进口试剂耗材,保证数据质量;
丰富的引物设计经验,电泳检测产物特异性;
根据实验目的选择内参,真实反映样品间的差异。
服务内容
一、相对定量
1.
设计并合成Realtime PCR引物
2.
引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG(SYBR® Green)的PCR反应的优化。
3. RNA
抽提
a.
若实验对象为组织样品,取适量(50-100mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),匀浆后抽提RNA。
b. 若实验对象为细胞样品,每份样品取1×10
6
~1×10
7
细胞,完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA。
4. RNA
质量检测
a. 紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,以计算其浓度并评估RNA纯度。
b. 使用甲醛电泳试剂(ambion)进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。
5. cDNA
合成
按照逆转录酶(Invitrogen或Promega)5. 使用说明将样品RNA逆转录为cDNA。
6.
制备标准曲线样品(可选)
进行相对定量,需要先将样品的目的基因以及管家基因进行PCR扩增, 其产物进行梯度稀释用于做标准曲线。
7.
实时定量PCR
标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中(其中TaqBead热启动聚合酶来自Promega公司),进行RealTime PCR扩增和检测
8.
数据分析
检测结果进行标准曲线分析,以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差,所得结果代表某样品的目的基因相对含量。
9.
提供实验报告
:
包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR实验结果及相关图表。
DNA/RNA
提取 80元/样
逆转录 80元/样
引物设计与实验验证 150元/对(提供验证成功引物及序列,第二次检测免收)
qPCR
(三次重复SYBR Green1法):
样本数<20 100元/样
样本数20-100 80元/样
样本数>100 60元/样
二、绝对定量
服务内容:
使用的SYBR荧光染料法,依托
ABI7500
定量PCR系统,提供实时荧光绝对定量PCR技术服务。
1.
根据客户提供基因序列设计标准品;
2.
根据标准品绘制标准曲线
3. Real-Time PCR,进行扩增曲线、溶解曲线、实验结果分析。
4.
提供完整的实验报告。
报告内容
1.
完整的实验过程报告;
2. 数据分析结果(发表级图片形式)。
服务价格
荧光定量PCR标准曲线绘制
服务项目
实验说明
实验周期
实验报价
标准质粒构建
基因合成或PCR克隆法构建
1
周
500
元
标准曲线绘制
选择6个浓度梯度绘制标准曲线
2
个工作日
600
元
进行绝对定量PCR的实验,需委托吉田生物构建标准品质粒,以标准质粒构建标准曲线(选6个浓度梯度,3次重复)
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