2′,7′-Dichlorofluorescein diacetate (solution) 

2′,7′-Dichlorofluorescein diacetate (DCFH2-DA) (solution) is a cell-permeable fluorescent probe. 2′,7′-Dichlorofluorescein diacetate can be used to detect the generation of reactive oxygen intermediates and for assessing the overall oxidative stress in toxicological phenomenon^[1][2].
Solvent and concentration: DMSO: 10 mM
The 1 mL volume is defined as the base specification. All larger sizes correspond to incremental volumes of this base.

使用 2',7'-Dichlorofluorescein 作为荧光探针来定量细胞内的 ROS^[2]
一、 实验试剂
1. 20,70-dichlorofluorescein diacetate (DCFH2-DA) ：100 nM。
2. CoCl₂：20 mM，用作外部 DCF 荧光淬灭剂。
3. 细胞系：
K562：人类红白血病细胞系 (药物敏感)。
K562/adr：K562 的耐药亚系。
GLC4：人类小细胞肺癌细胞系 (药物敏感)。
GLC4/adr：GLC4 的耐药亚系。
4. 培养基：RPMI 1640，添加 10% 胎牛血清 (FBS)。
二、实验步骤
1.细胞培养：
(1) 将 K562、K562/adr、GLC4、GLC4/adr 细胞分别接种到 RPMI 1640 培养基中，添加 10% FBS，培养在 37°C、5% CO2 的恒温培养箱中。
(2) 细胞密度应为 5×10⁵ 细胞/mL，并在 24 小时后进行下一步处理。
2. ROS测定：
(1) 处理细胞：加入 20 μM CoCl₂ (外部荧光淬灭剂) 和 100 nM DCHF-DA，继续培养 30 分钟，确保 ROS 能够充分氧化 DCHF。
(2) 测量荧光：使用 Perkin-Elmer LS-50B 荧光分光光度计，设置激发波长为 502 nm，发射波长为 523 nm，监测 DCF 的荧光强度。
(3) 数据分析：
根据荧光强度变化拟合动力学模型，计算 DCHF-DA 去乙酰化率常数 (ke) 和 ROS 氧化反应的速率常数 (k2[ROSi])。使用该模型，定量分析不同细胞系中 ROS 的浓度。
三、实验结果
1. ROS 浓度：不同细胞系中 ROS 浓度不同，K562 细胞的平均 ROS 浓度为 0.67 nM，K562/adr 细胞为 0.60 nM，GLC4 为 0.66 nM，而 GLC4/adr 细胞为 0.81 nM。
2. 实验验证：使用 CoCl2 作为淬灭剂，可以有效去除外部 ROS 信号，确保得到的 DCF 荧光信号准确反映细胞内 ROS 的浓度。
在本实验中，药物耐药细胞系 (如 K562/adr 和 GLC4/adr) 显示出较高的 ROS 水平，提示其抗药性机制可能与 ROS 的积累有关。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

485.27

C₂₄H₁₄Cl₂O₇

2044-85-1

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• [1]. Afri M, et al. Active oxygen chemistry within the liposomal bilayer. Part IV: Locating 2',7'-dichlorofluorescein (DCF), 2',7'-dichlorodihydrofluorescein (DCFH) and 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) in the lipid bilayer. Chem Phys Lipids. 2004 Aug;131(1):123-33.  [Content Brief]

  [2]. Loetchutinat C, et al. Spectrofluorometric determination of intracellular levels of reactive oxygen species in drug-sensitive and drug-resistant cancer cells using the 2′, 7′-dichlorofluorescein diacetate assay[J]. Radiation Physics and Chemistry, 2005, 72(2-3): 323-331.