5(6)-TAMRA (solution)  (Synonyms: 5(6)-Carboxytetramethylrhodamine (solution))

5(6)-TAMRA (solution) (5(6)-Carboxytetramethylrhodamine (solution)) is a fluorescent dye molecule widely used as a label for peptides and proteins (Ex/Em = 520/600 nm).
Solvent and concentration: DMSO: 10 mM
The 1 mL volume is defined as the base specification. All larger sizes correspond to incremental volumes of this base.

原液制备
1. 蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 2 mg/mL。
1) 蛋白溶液 pH 值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 2 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
使用前需先使用缩合液 (500 μg/mL) (HY-D0178) 活化后方可进行后续标记实验。
3. 染料工作液用量计算
标记反应所需的 5(6)-TAMRA 染料用量取决于要标记蛋白的用量，5(6)-TAMRA 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg 5(6)-TAMRA 染料，则所需 5(6)-TAMRA 体积为 2.88 μL，详细计算流程如下：
1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) ×mL (IgG)/MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10^-6 mmol
2) mmol (5(6)-TAMRA) = mmol (IgG) ×10 =6.7×10^-6 mmol×10 = 6.7×10^-5 mmol
3) μL (5(6)-TAMRA) = mmol (5(6)-TAMRA) ×MW (5(6)-TAMRA)/mg/μL (5(6)-TAMRA) = 6.7×10^-5 mmol× 430.45 mg/mmol/0.01 mg/μL =2.88 μL (5(6)-TAMRA)


使用方法
1. 标记反应
1) 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL 5(6)-TAMRA 染料缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10–15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
2. 蛋白纯化脱盐
以下方案是使用 SepHadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1) 按照生产说明书制备 SepHadex G-25 柱。
2) 将反应混合物装入 SepHadex G-25 色谱柱顶部。
3) 当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需样品中加入更多的 PBS (pH 7.2-7.4),完成柱纯化。结合含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

430.45

C₂₅H₂₂N₂O₅

98181-63-6

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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