Modified Masson Staining Kit 

Masson 三色染色液 Plus

结缔组织从狭义上讲主要由三类纤维成分构成：胶原纤维、网状纤维和弹性纤维。其中，胶原纤维 (Collagen Fiber) 是分布最广、含量最丰富的一类纤维成分，在维持组织结构和机械强度方面发挥着重要作用。

Masson 染色 (Masson Staining) 是结缔组织染色中应用最为广泛且经典的方法之一，也是目前用于胶原纤维显示和鉴别的权威技术方法。通过多种染料的组合使用，在同一组织切片中同时染细胞核、胶原纤维以及肌纤维等不同组织成分，从而实现组织结构的清晰区分。

Masson 三色染色的原理主要与阴离子染料分子的大小及组织结构的渗透性差异有关。通常情况下，小分子量染料更容易穿透结构致密、渗透性较低的组织，而大分子量染料则更易进入结构疏松、渗透性较高的组织。在该染色体系中，淡绿 (Light Green) 或苯胺蓝 (Aniline Blue) 等染料分子量较大，主要与胶原纤维结合，而肌纤维则主要被酸性复红类染料染成红色。因此，经 Masson 染色后，通常可观察到：肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色 (淡绿染料) 或蓝色 (苯胺蓝染料)，从而能够有效区分胶原纤维与肌纤维结构。

MCE 改良 Masson 三色染色试剂盒通过天青石蓝苏木素淡染细胞核，相比常规方法分化时间更短，具有无毒环保、操作简便、性能稳定等特点，染色后显色清晰、对比度高。染色切片保存时间长且不易褪色，有利于长期保存及图像分析。可用于结缔组织、肌肉组织及胶原纤维相关研究，适用于组织学观察及相关病理学分析。

天青石蓝染色液、Mayer 苏木素染色液：4°C，1 年。避光保存

Bouin 固定液、乙醇分化液 (酸性)、丽春红品红染色液、磷钼酸溶液、苯胺蓝染色液、弱酸溶液：RT，1 年。避光保存

试剂准备

1. 固定液：10% 福尔马林

2. 其他试剂：二甲苯、中性树胶或封片剂、梯度乙醇、蒸馏水等

操作步骤

注：正式染色操作前建议先进行预实验，以确定组织切片的最佳染色条件。

1. 切片脱蜡与水化：将石蜡切片进行常规脱蜡至水化，备用。

2. Bouin 媒染处理：将切片置于 Bouin 固定液中，于室温作用过夜，或置于 37°C 恒温箱中孵育约 2 h 进行媒染处理。随后用流水冲洗，直至切片上的黄色基本消失。

3. 天青石蓝染色：将切片置于天青石蓝染色液中染色 2-3 min，随后用水稍作冲洗。

4. Mayer 苏木素染色：将切片置于 Mayer 苏木素染色液中染色 2-3 min，随后轻轻水洗。

5. 分化处理：将切片置于酸性乙醇分化液中分化约 2-10 s，随后以蒸馏水冲洗 10 min。

6. 丽春红品红染色：将切片置于丽春红品红染色液中染色 5-10 min。随后用蒸馏水轻轻冲洗。

7. 磷钼酸处理：将切片置于磷钼酸溶液中处理约 10 min。

8. 苯胺蓝染色：无需水洗，直接将切片直接放入苯胺蓝染液中染色 5 min。再用弱酸工作液冲洗 2 min。

9. 弱酸处理：将切片置于弱酸溶液中处理约 2 min，以增强染色对比度。

10. 脱水处理：用 95% 乙醇快速脱水，随后用无水乙醇脱水 3 次，每次 5-10 s。

11. 透明与封片：经二甲苯脱蜡透明处理后，使用中性树胶或封片剂封片，在显微镜下进行观察并可进行图像采集与分析。

染色结果判读

1. 胶原纤维：呈蓝色。

2. 肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞：呈红色。

3. 细胞核：呈蓝褐色。

1. 本染色液可采用滴染法或浸染法进行染色；若切片数量较少，建议使用滴染法。

2. 切片脱蜡应尽量彻底，组织固定起着关键作用。使用不同类型的固定液可能会延长或缩短染色时间。

3. 酸性乙醇分化时间应根据切片厚度、组织类型及切片新旧情况适当调整。

4. 弱酸溶液可使染色颜色更清晰鲜艳。如用量较大，可自行配制 0.1-0.3% 乙酸溶液替代。

5. 磷钼酸的作用是将被红染的胶原纤维分化为无色或淡红色，而肌纤维和纤维素仍保持红色。同时，磷钼酸对胶原纤维起到媒染作用，使胶原纤维与大分子染料结合更均匀。

6. 苯胺蓝染色后需使用弱酸溶液进行处理，其目的是去除原浆中的蓝色染料，使染色结果更加鲜艳清晰、对比明显。若组织采用 Zenker 固定液固定，可适当延长弱酸溶液的处理时间，一般可延长至 约 5 min。

7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。