肠道菌计数琼脂(VRBGA)是一种用于食品、水质等样品中肠道菌计数的选择性培养基,其核心特点是利用结晶紫和胆盐抑制杂菌,同时通过葡萄糖发酵指示剂显色来鉴别目标菌。
核心成分与原理
每升肠道菌计数琼脂培养基的典型配方如下:7.0、3.0g 蛋白胨、酵母浸粉,提供氮源、维生素和生长因子。10.0g 葡萄糖,作用为发酵糖类,用于产酸检测。5.0g 氯化钠,用于维持渗透压平衡。1.5、0.002g 3号胆盐、结晶紫,抑制革兰氏阳性菌等非目标菌。0.03g 中性红,作为pH指示剂(酸性变红,碱性为黄色)。12.0 - 13.0g 琼脂,培养基凝固剂。
检测原理:肠道菌可发酵葡萄糖产酸,使培养基pH下降,导致指示剂中性红变色,从而形成粉红色或红色菌落。胆盐和结晶紫则共同作用,抑制非目标菌生长,保证选择性。
质量控制
肠道菌计数琼脂在接种标准菌株后,在36±1℃培养18-24小时,应呈现如下典型特征,大肠埃希氏菌呈红色或粉红色菌落,可有沉淀环。沙门氏菌是无色或琥珀色菌落。
注意事项
肠道菌计数琼脂的煮沸时间需要严格控制在2分钟以内,过度加热会降低选择性并影响凝胶效果。避免高压灭菌,培养基中的糖类和指示剂在高温高压下会被破坏,因此只能通过煮沸灭菌。
使用标准
肠道菌计数琼脂其使用标准参考GB 4789.3-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》,规定了两种主要方法。平板计数法: 使用 VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)。大肠菌群发酵乳糖产酸,在VRBA上形成紫红色菌落,周围有红色的胆盐沉淀环[1]。MPN法(最可能数法): 使用LST(月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤)和BGLB(煌绿乳糖胆盐肉汤)进行发酵确证[1]。VRBGA与VRBA的区别:肠道菌计数琼脂(VRBGA)的碳源是葡萄糖,而另一种常见培养基“结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)”的碳源是乳糖。VRBGA用于计数所有能发酵葡萄糖的肠道菌,范围更广。
参考文献
[1]国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局.GB 4789.3-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》[S].中国标准出版社.2025.