IPTG来自诱导表达后的蛋白上样问题
经过IPTG诱导完成后的大肠杆菌BL21(DE3)进行SDS-PAGE蛋白检测诱导表达效果,对菌体该如何处理?
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回答者:网友
IPTG诱导后一般为胞内表达。
1.检验蛋白的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样。对照为未诱导的菌体。
2.蛋白的可在攻临即溶性鉴定:离心取菌体后,用PBS重悬,超声破碎,分离上清和残片,上清直接制样;残片需再次重悬后,制样上样。观察上清和残片中条带的360问答情况。