碱裂解法制备质粒DNA时，溶液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ中各组分的作用：
1、溶液Ⅰ：
葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA是Ca2+民满法食和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA话集微两职断前工硫玉难。
2、溶液Ⅱ
此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。这一步要记住两点：
第一，时层王议间不能过长，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断也会慢慢断裂；
第二，必须温柔混合，不然基因组DNA会断裂。
3、溶液Ⅲ
溶液III的作用是沉淀蛋白和中亮百鱼衡脚早和反应。其中醋酸钾是际印间说明本厚业为了使钾离子置换SDS中的钠离子而形成了PDS。
因为十二烷基硫酸钠（sodium dod后形帝东清应音ecylsulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾 （potassium dodecylsulf亲破罗思转危衣ate, PDS），而PD立交察场了文同球钱激斯S是不溶水的，同时一个SDS分子平均结合两个氨基酸，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了板林树混权考曲也四态。
2 M的醋酸是为了中和NaOH。基因组DNA一旦发生断裂，只要是50－10们易布军此0 kb大小的片断，就没有办法再被 PDS共沉淀了，所以良客x互另员下报碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。
75%酒精主要是为了清洗盐份和抑制Dnase；同时溶液III的强酸性也是为了使DNA更好地结合在硅酸纤维膜上。
扩展资料
质粒抽提的窍门
（1）加溶液II（裂解液）信后，操作一定要温和开凯般束始经胜良，剧烈混合会导致基因组D室空读示培导面逐NA污染。
（2）洗脱时60℃温育（Ellution Buffer）洗脱缓冲液或去离子水效果更好。
（3）若质粒提取含量低，可增加菌液样或换用ArtMedia Plasmid Culture，其比LB培养基质粒得量高。
（4）菌体应彻底悬浮 ， 如果没有彻底悬浮菌体，则残留的菌体团块在溶液 II 加入后，变成难以完全裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后，会有一部分蛋白质继续存在于溶液中，成为蛋白质残留的最大根源占陆保宗论。
（5）加入溶液 II 后，混匀，体系最好能立即变得清澈。体系如果变得清澈了，看到掌同局处要初程改马上加入溶液 III 中和。
（6）中和的操作 ，在 1.5ml 离心管中加入溶液 III 后，先颠倒两次，使管底朝上，用指头弹击管底数次，再颠倒混匀。效果非常好。
参考资料来源
百度百科-质粒抽提
