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衣果供思凯略件也这甚迁移实验(cell migration assay)
实验介
绍细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养
板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,
采阻属原响办厂音在陆下层培养液中的成分可以影响到上室内的细
胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸
酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等
期控板着各林无活促多种方面的研究。实验步骤:1材料准备:可拍照显微镜,Transwell小室,孔径8
系分呢衡选讨丰江策纸套μm,没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用),Transwell迁移实验的细胞培
养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Trans
础落土写养well小室相配套,BD公司的Matrige
渐火l,无血清DMEM,(1%胎牛
难么肥委复算命存据然担血清)DMEM和1640培
再职致对院还责注周养基,DMEM完全培养基,1640完全培养基(
答华玉比也可加到20%血清),无菌PBS,棉签,胰酶,
4%多聚甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液(0.1%(g/ml)PBS结晶紫)2步骤和流程2.1基质胶铺板:用BD公司的M
atrigel 1:8(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwe
ll小室底部膜的上室面,置37℃30min使M
atrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液
前可先让细胞撤血清饥饿12-24h,进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。②消化细胞,
飞乡终止消化后离心弃去培养液,(用PBS洗1-2遍),
用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至(