关于设计引物

酶切位点的保护碱基基本是大家常用以及默认的。Kpn1为:GGGTACCC 、GGGGTACCCC、CGGGGTACCCCG 三个，长度你可以根据你的引物来选择。Xba1为:CTCTAGAG 、G来自CTCTAGAGC 、TGCTCTAGAGCA 、CTAGTCTAGACTAG。具体要你自己来选择哪一个。比如退火温度，GC比值等等。保护碱基资料上都有，常见的酶切位点都有360问答保护碱基。设计引物你可以用primer5和Oligo6软件来设计，参数全部都能算出来，包括发夹结构。你也可以定点突变来引入你的酶切位点，但是也很麻烦。其他的方法还有甲基化筛选等等，我就不是很熟悉了。