原代乳小鼠心肌细胞培养求助

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(转载,仅供参考)(1难宗伯交看激示长协班)取BATcell的Isol复武火场布鸡势住ationbuffer按1:1000向其中加入p/s,4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase或尽领开(c5138),用滤器过滤消化液,并置于37°Cwaterbath预热。(2)Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1)将新生Mice泡入70%EtoH中约5mins进行消毒;(出生后两天内)源顾现条吗待沉斤松晶快2)剪开其肩部中间的外皮,两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT(位于肩胛骨间的蝴蝶状组织,尽量勿取到其他多余组织)移入含PBS的60-mmdishes中;3)用PBS洗2~3遍;4)将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含c居什长建ollagenase的Isolationbuffer中;37°Cwaterbath中消化30mins5)30min后将消化液用力甩,以使附着的cell散落移著杀放宪待胞头派范;液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6)用筛网将消化液过滤至15ml离心管中,离心:200g,5min,弃上清;7)用Isolationbuffer(不含collagenase)吹起离心管底沉淀,混匀,离心:200g,5min,弃上来自清;8)用5ml20%FBS-DMEMmedium重悬cell,接于60-mmdishes360问答中,培养,次日先用培列轻肉图旧陆游裂他举养液清洗下再换液;取过很多次了,只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~!

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