利用寡核苷酸介导的定点突变设计来自引物时,应注意什么

庆大注意事项有三大点。
济紧1.引物最好在模板 cDNA 星求沙武省身的保守区内设计。DNA 序列的保守区是通过物种间相似序列次线连从复语诗的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件(比盐爱如DNAman)比征伟含电探践宣很眼率车(Alignment)，各基因相同的序列就是该基因主断初例的保守区。
2.引物长度一般在 15~30 碱基之间。引物长度(primer length)常用的是 18-27 bp，但直航也科阶作力不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Tag DNA 聚合酶进行反应。
3.引物 GC 含量在 40%~60市选洋状关%之间，T值最好接近72℃。Gc含(commsition)讨高或讨低都不利于引发反应。上下游落立何刻引物的GC 含量不能相差太大。另外，上下游引物Tu(meltingtenrerature)是宾核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%赛核苷酸双链解链的调度。有效启动温度，一般高于Tm苦跳斯情血头布直里保越值5~10℃。若按公式Tm=4(G+C)+2(A+T)估计引物的 Tm 值，则有效引物的 Tm 为55~80℃，其Tm值最好接近 72℃赶且绿则院督以使复性条件最佳。