生化鉴定常用三糖铁琼脂（TSIA）和KIA/MIU(AA+-/++-）和IMVC（++--）来初步鉴定。
最后鉴定依据全面生化反应，典型的大肠埃希菌的基本生化反应特征：TSIA（双糖铁）产酸/产气，产气、CIT（枸橼酸盐）阴性、URE（脲酶）阴性、IDN（吲哚）阳性、MOT（动力）+/-、ORN（鸟氨酸）+/-。
