从上面的反应可以看出1，3-二磷酸甘油酸是这两步反应的高能偶联中间物(水解时可释放出49.32kJ/mol的自由能)。在酶促反应中，这个超高能量的中间产物可以将高能磷酸基交给ADP，从而生成ATP，这就是所谓底物水平磷酸化。底物水平磷酸化是直接与代谢途径的某个特殊反应耦联，而氧化磷酸化是电子沿呼吸链传递产生的质子推动力造成的。因此，底物水平磷酸化不可能被氧化磷酸化解耦联剂抑制。砷酸盐与磷酸盐在结构上相似，并且几乎在所有磷酸化反应中都能取代磷酸盐。但是砷酸酯键比磷酸酯键的稳定性低得多，它能自发水解。甘油醛-3-磷酸脱氢酶能利用砷酸盐代替磷酸盐把新氧化的分子从酶分子中裂解下来，产生1-砷酸-3-磷酸甘油酸。然而该产物经非酶促水解即可生成3-磷酸甘油酸和游离的砷酸盐：
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因此，甘油醛-3-磷酸脱氢酶催化的净反应是：
甘油醛-3-磷酸+NAD++H2O→3-磷酸甘油酸+NADH+H+
不能形成高能中间物，因而就不能将超高能量的磷酸化合物上的高能磷酸基转移到ADP生成ATP(底物水平磷酸化)，使超高能量的高能化合物的形成与ATP的生成相分离。所以，在这里砷酸盐可视为一种底物水平磷酸化的解偶联剂。
