t华载体克隆测序没有突变连接表达载体碱基为什么突变了

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回答者:网友
首先看你是做什么用了,做什么用很关键的,你如果想表达蛋白,那么重新克隆吧
或者用点突变试剂盒来自,不过这个太贵。
建议你克隆基因的时候选用高保真的酶,这样突变概率比较小。也不会比普通酶贵很多。
如果克隆的顺利的话 ,应该很块的谓巴爱,实在是不想重新克隆,那做点突变也很耗时间,耗钱。也可以用突变PCR,选择高保真的酶做PCR扩增然后拼接,不过要注意真正的高保真PCR酶末端是完全没有A的,必须要做一步3‘加A的步骤才能克隆到T载体里,如果哪家忽悠他们的酶是高保真酶还能直接克隆到T载体里那这款酶要么根本就不是高保真酶,要么是高保真酶和Taq的混合酶,理解了原理就不会那么容易被忽悠了风德超拿。又或者多选择几个单克隆去测x卷屋师款背职乱除奏贵序。。。。如果是做敲除,构建重组载体,那大可不必。做了几次构建,都有相同的突变
那大概就是模板突变了
很简单的处理方法,分两段PCR,友曾便定技零住准用引物修正突变位置,最后overlap在一起。
直接把质粒P下来的点突变方法也OK,不需要天希买试剂盒,多看看相关文献和经验就行

哈,,如有帮助,,万望采纳哦亲

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